安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2002年
3期
169-172
,共4页
姜永忠%王明丽%李艳秋%余莉%胡勇%毕克菊
薑永忠%王明麗%李豔鞦%餘莉%鬍勇%畢剋菊
강영충%왕명려%리염추%여리%호용%필극국
杂交瘤%抗体,单克隆/生物合成%巨细胞病毒属
雜交瘤%抗體,單剋隆/生物閤成%巨細胞病毒屬
잡교류%항체,단극륭/생물합성%거세포병독속
目的制备具有中和人巨细胞病毒(HCMV)感染作用的单克隆抗体并对其进行生物学活性鉴定.方法用HCMV抗原免疫Balb/c小鼠5、6次后,取致敏的脾脏B淋巴细胞和HGPRT-SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合,在HAT选择培养基中培养2周,间接ELISA法筛选克隆.挑取分泌抗体的杂交瘤株,再用间接ELISA进行鉴定,最终获得抗HCMV的阳性杂交瘤细胞株,用Ouchterlony法鉴定McAb的亚类.小鼠腹腔内接种杂交瘤细胞,取腹水经盐析法提纯IgG.Lowry法测定蛋白质浓度,在第6代HF细胞株及原代培养新生乳鼠脑神经细胞上进行微量中和实验.结果获得了4株杂交瘤细胞株,制备的F9McAbs盐析后蛋白质浓度为11.2 g/L,血清学试验证明该McAbs能和HCMV抗原进行特异性结合,制备的IgG具有高度特异性.且体外实验已证实,该McAb具有中和抗体的性质.结论通过杂交瘤技术制备的HCMV单克隆抗体能在体外中和HCMV致病变效应,为该McAb作为抗人巨细胞病毒治疗药物的研发奠定了基础.
目的製備具有中和人巨細胞病毒(HCMV)感染作用的單剋隆抗體併對其進行生物學活性鑒定.方法用HCMV抗原免疫Balb/c小鼠5、6次後,取緻敏的脾髒B淋巴細胞和HGPRT-SP2/0小鼠骨髓瘤細胞進行融閤,在HAT選擇培養基中培養2週,間接ELISA法篩選剋隆.挑取分泌抗體的雜交瘤株,再用間接ELISA進行鑒定,最終穫得抗HCMV的暘性雜交瘤細胞株,用Ouchterlony法鑒定McAb的亞類.小鼠腹腔內接種雜交瘤細胞,取腹水經鹽析法提純IgG.Lowry法測定蛋白質濃度,在第6代HF細胞株及原代培養新生乳鼠腦神經細胞上進行微量中和實驗.結果穫得瞭4株雜交瘤細胞株,製備的F9McAbs鹽析後蛋白質濃度為11.2 g/L,血清學試驗證明該McAbs能和HCMV抗原進行特異性結閤,製備的IgG具有高度特異性.且體外實驗已證實,該McAb具有中和抗體的性質.結論通過雜交瘤技術製備的HCMV單剋隆抗體能在體外中和HCMV緻病變效應,為該McAb作為抗人巨細胞病毒治療藥物的研髮奠定瞭基礎.
목적제비구유중화인거세포병독(HCMV)감염작용적단극륭항체병대기진행생물학활성감정.방법용HCMV항원면역Balb/c소서5、6차후,취치민적비장B림파세포화HGPRT-SP2/0소서골수류세포진행융합,재HAT선택배양기중배양2주,간접ELISA법사선극륭.도취분비항체적잡교류주,재용간접ELISA진행감정,최종획득항HCMV적양성잡교류세포주,용Ouchterlony법감정McAb적아류.소서복강내접충잡교류세포,취복수경염석법제순IgG.Lowry법측정단백질농도,재제6대HF세포주급원대배양신생유서뇌신경세포상진행미량중화실험.결과획득료4주잡교류세포주,제비적F9McAbs염석후단백질농도위11.2 g/L,혈청학시험증명해McAbs능화HCMV항원진행특이성결합,제비적IgG구유고도특이성.차체외실험이증실,해McAb구유중화항체적성질.결론통과잡교류기술제비적HCMV단극륭항체능재체외중화HCMV치병변효응,위해McAb작위항인거세포병독치료약물적연발전정료기출.
