中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2004年
12期
2320-2324
,共5页
李朝霞%梁敏坚%李林%胡波%朱振宇
李朝霞%樑敏堅%李林%鬍波%硃振宇
리조하%량민견%리림%호파%주진우
肝炎核心抗原,乙型%免疫反应性%基因表达%毕赤酵母
肝炎覈心抗原,乙型%免疫反應性%基因錶達%畢赤酵母
간염핵심항원,을형%면역반응성%기인표체%필적효모
目的:研究乙肝病毒核心(C)基因在毕赤(Pichia pastoris)酵母中的表达,以期获得高效表达的具有良好免疫反应性和特异性的重组乙肝病毒核心蛋白(HBcAg).方法: 采用PCR法从含HBV全基因序列的质粒pHBV1中扩增C基因,亚克隆到pGEM-T载体中,经DNA序列分析后将目的基因定向克隆到酵母表达载体pPIC9中,构建重组质粒pPIC9-cAg.然后用电转法将重组质粒转化入酵母菌GS115,0.5%甲醇诱导表达.采用SDS-PAGE、Western blot和ELISA法对表达产物进行分析.结果: 限制性内切酶酶切和DNA序列分析证实HBV C基因已正确克隆到酵母表达载体pPIC9中;SDS-PAGE结果显示重组HBcAg在毕赤酵母细胞中表达;ELISA及Western blot分析表明,表达产物具有良好的免疫反应性和特异性,重组HBcAg的滴度可达1:12 800.结论: 成功构建了pPIC9-cAg重组质粒,并在毕赤酵母中高效表达了具有良好免疫反应性和特异性的重组HBcAg,为进一步研制抗-HBc诊断试剂盒奠定了基础.
目的:研究乙肝病毒覈心(C)基因在畢赤(Pichia pastoris)酵母中的錶達,以期穫得高效錶達的具有良好免疫反應性和特異性的重組乙肝病毒覈心蛋白(HBcAg).方法: 採用PCR法從含HBV全基因序列的質粒pHBV1中擴增C基因,亞剋隆到pGEM-T載體中,經DNA序列分析後將目的基因定嚮剋隆到酵母錶達載體pPIC9中,構建重組質粒pPIC9-cAg.然後用電轉法將重組質粒轉化入酵母菌GS115,0.5%甲醇誘導錶達.採用SDS-PAGE、Western blot和ELISA法對錶達產物進行分析.結果: 限製性內切酶酶切和DNA序列分析證實HBV C基因已正確剋隆到酵母錶達載體pPIC9中;SDS-PAGE結果顯示重組HBcAg在畢赤酵母細胞中錶達;ELISA及Western blot分析錶明,錶達產物具有良好的免疫反應性和特異性,重組HBcAg的滴度可達1:12 800.結論: 成功構建瞭pPIC9-cAg重組質粒,併在畢赤酵母中高效錶達瞭具有良好免疫反應性和特異性的重組HBcAg,為進一步研製抗-HBc診斷試劑盒奠定瞭基礎.
목적:연구을간병독핵심(C)기인재필적(Pichia pastoris)효모중적표체,이기획득고효표체적구유량호면역반응성화특이성적중조을간병독핵심단백(HBcAg).방법: 채용PCR법종함HBV전기인서렬적질립pHBV1중확증C기인,아극륭도pGEM-T재체중,경DNA서렬분석후장목적기인정향극륭도효모표체재체pPIC9중,구건중조질립pPIC9-cAg.연후용전전법장중조질립전화입효모균GS115,0.5%갑순유도표체.채용SDS-PAGE、Western blot화ELISA법대표체산물진행분석.결과: 한제성내절매매절화DNA서렬분석증실HBV C기인이정학극륭도효모표체재체pPIC9중;SDS-PAGE결과현시중조HBcAg재필적효모세포중표체;ELISA급Western blot분석표명,표체산물구유량호적면역반응성화특이성,중조HBcAg적적도가체1:12 800.결론: 성공구건료pPIC9-cAg중조질립,병재필적효모중고효표체료구유량호면역반응성화특이성적중조HBcAg,위진일보연제항-HBc진단시제합전정료기출.
