中国寄生虫病防治杂志
中國寄生蟲病防治雜誌
중국기생충병방치잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITIC DISEASE CONTROL
2005年
1期
8-11
,共4页
郭岚%古钦民%李瑛%周怀瑜%赵群力%丛华%何深一
郭嵐%古欽民%李瑛%週懷瑜%趙群力%叢華%何深一
곽람%고흠민%리영%주부유%조군력%총화%하심일
弓形虫属%P30基因%P22基因%克隆
弓形蟲屬%P30基因%P22基因%剋隆
궁형충속%P30기인%P22기인%극륭
目的构建编码弓形虫RH株表面抗原P30、P22复合基因的真核表达重组质粒, 为进一步表达融合蛋白及研制核酸疫苗做准备. 方法用弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/氯仿法抽提弓形虫基因组DNA;用PCR技术从基因组DNA中扩增编码表面抗原P30、P22的基因片段,分别重组入pMD18-T载体中.将pMD18-T载体中的P30、P22基因片段分别酶切,定向克隆入pUC18克隆载体中, pUC18-P30-P22中的P30-P22片段经酶切、纯化后,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,用酶切、PCR及测序的方法对重组子进行鉴定. 结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出特异的P30及P22片段;大小均与预测值相符;克隆pUC18-P30-P22重组质粒的酶切片段分别与P30、P22基因大小一致;经亚克隆、筛选鉴定获得了pcDNA3.1-P30-P22重组质粒,所测P30、P22基因序列与文献报道一致.结论成功构建弓形虫pUC18-P30-P22重组质粒和pcDNA3.1-P30-P22重组质粒,为研制弓形虫DNA疫苗奠定了基础.
目的構建編碼弓形蟲RH株錶麵抗原P30、P22複閤基因的真覈錶達重組質粒, 為進一步錶達融閤蛋白及研製覈痠疫苗做準備. 方法用弓形蟲RH株腹腔接種小鼠,收集腹水,酚/氯倣法抽提弓形蟲基因組DNA;用PCR技術從基因組DNA中擴增編碼錶麵抗原P30、P22的基因片段,分彆重組入pMD18-T載體中.將pMD18-T載體中的P30、P22基因片段分彆酶切,定嚮剋隆入pUC18剋隆載體中, pUC18-P30-P22中的P30-P22片段經酶切、純化後,亞剋隆入pcDNA3.1(-)真覈錶達載體,用酶切、PCR及測序的方法對重組子進行鑒定. 結果從弓形蟲RH株基因組DNA中擴增齣特異的P30及P22片段;大小均與預測值相符;剋隆pUC18-P30-P22重組質粒的酶切片段分彆與P30、P22基因大小一緻;經亞剋隆、篩選鑒定穫得瞭pcDNA3.1-P30-P22重組質粒,所測P30、P22基因序列與文獻報道一緻.結論成功構建弓形蟲pUC18-P30-P22重組質粒和pcDNA3.1-P30-P22重組質粒,為研製弓形蟲DNA疫苗奠定瞭基礎.
목적구건편마궁형충RH주표면항원P30、P22복합기인적진핵표체중조질립, 위진일보표체융합단백급연제핵산역묘주준비. 방법용궁형충RH주복강접충소서,수집복수,분/록방법추제궁형충기인조DNA;용PCR기술종기인조DNA중확증편마표면항원P30、P22적기인편단,분별중조입pMD18-T재체중.장pMD18-T재체중적P30、P22기인편단분별매절,정향극륭입pUC18극륭재체중, pUC18-P30-P22중적P30-P22편단경매절、순화후,아극륭입pcDNA3.1(-)진핵표체재체,용매절、PCR급측서적방법대중조자진행감정. 결과종궁형충RH주기인조DNA중확증출특이적P30급P22편단;대소균여예측치상부;극륭pUC18-P30-P22중조질립적매절편단분별여P30、P22기인대소일치;경아극륭、사선감정획득료pcDNA3.1-P30-P22중조질립,소측P30、P22기인서렬여문헌보도일치.결론성공구건궁형충pUC18-P30-P22중조질립화pcDNA3.1-P30-P22중조질립,위연제궁형충DNA역묘전정료기출.
