重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2005年
9期
1392-1394
,共3页
siRNA%DNA表达载体%构建%应用
siRNA%DNA錶達載體%構建%應用
siRNA%DNA표체재체%구건%응용
目的构建siRNA的DNA表达载体,为研究RNAi在哺乳动物内抑制靶基因表达奠定基础.方法合成含靶向EGFP基因的siRNA转录模板的发夹结构,将载体质粒pTZU6 +1用Sal I + Xba I进行双酶切后,T4DNA连接酶连接成重组质粒,转染到肝癌SMMC-7721细胞中进行表达,检测转染前后EGFP表达的变化.结果重组质粒在大肠杆菌菌株JM109内扩增.提纯、纯化后用HindⅢ、EcoRI酶切鉴定及测序鉴定证明EGFP-siRNA转录模板完整、正确的插入到pTZU6+1质粒中,并在mRNA和蛋白水平抑制了肝癌SMMC-7721细胞中的EGFP表达.结论成功构建了siRNA的DNA表达载体,并初步应用于靶基因的抑制.
目的構建siRNA的DNA錶達載體,為研究RNAi在哺乳動物內抑製靶基因錶達奠定基礎.方法閤成含靶嚮EGFP基因的siRNA轉錄模闆的髮夾結構,將載體質粒pTZU6 +1用Sal I + Xba I進行雙酶切後,T4DNA連接酶連接成重組質粒,轉染到肝癌SMMC-7721細胞中進行錶達,檢測轉染前後EGFP錶達的變化.結果重組質粒在大腸桿菌菌株JM109內擴增.提純、純化後用HindⅢ、EcoRI酶切鑒定及測序鑒定證明EGFP-siRNA轉錄模闆完整、正確的插入到pTZU6+1質粒中,併在mRNA和蛋白水平抑製瞭肝癌SMMC-7721細胞中的EGFP錶達.結論成功構建瞭siRNA的DNA錶達載體,併初步應用于靶基因的抑製.
목적구건siRNA적DNA표체재체,위연구RNAi재포유동물내억제파기인표체전정기출.방법합성함파향EGFP기인적siRNA전록모판적발협결구,장재체질립pTZU6 +1용Sal I + Xba I진행쌍매절후,T4DNA련접매련접성중조질립,전염도간암SMMC-7721세포중진행표체,검측전염전후EGFP표체적변화.결과중조질립재대장간균균주JM109내확증.제순、순화후용HindⅢ、EcoRI매절감정급측서감정증명EGFP-siRNA전록모판완정、정학적삽입도pTZU6+1질립중,병재mRNA화단백수평억제료간암SMMC-7721세포중적EGFP표체.결론성공구건료siRNA적DNA표체재체,병초보응용우파기인적억제.
