CAJ | 학술논문

目的: 分离培养类风湿关节炎(RA)滑膜细胞、检测其表面标志及研究其对软骨的侵蚀特性.方法: 取6例RA患者滑膜,分别采用组织块、胰蛋白酶消化及胶原酶、胰蛋白酶先后消化培养后,用相差显微镜观察细胞的形态、用流式细胞术(FCM)检测培养细胞表面标记CD3、CD19、CD14、CD68、CD44、CD55、CD90及细胞内脯氨酰-4-羟基化酶(Prolyl-4-hydroxylase)的表达并与传统的免疫组化染色法检测波形蛋白的表达相比较.并用SCID小鼠研究成纤维样滑膜细胞(FLS)对软骨的侵蚀作用.结果: (1)3种方法均分离出FLS,胶原酶与胰蛋白酶先后消化法分离细胞所需时间少、获得的细胞数多、纯度较高.(2)第2代细胞与第3代细胞的均质性分别达90%及98%以上.(3)在第3～6代的细胞比较稳定,增殖活跃;第7代以后增长缓慢,逐渐老化.(4)流式细胞术分析显示,原代细胞随着传代次数的增加逐渐纯化,第3～6代CD90+细胞＞98%,脯氨酰4-羟基化酶+细胞＞98%;与免疫组化检测波形蛋白的表达相一致.(5)将第4～5代的细胞和软骨一起植入SCID小鼠,或单独注入SCID小鼠的膝关节,都可导致软骨的浸蚀性破坏.结论: 以胶原酶与胰蛋白酶先后消化分离FLS,效果较好,CD90、脯氨酰4-羟基化酶可作为鉴定FLS的标志.用SCID小鼠可研究FLS对软骨的侵蚀特性.
목적: 분리배양류풍습관절염(RA)활막세포、검측기표면표지급연구기대연골적침식특성.방법: 취6례RA환자활막,분별채용조직괴、이단백매소화급효원매、이단백매선후소화배양후,용상차현미경관찰세포적형태、용류식세포술(FCM)검측배양세포표면표기CD3、CD19、CD14、CD68、CD44、CD55、CD90급세포내포안선-4-간기화매(Prolyl-4-hydroxylase)적표체병여전통적면역조화염색법검측파형단백적표체상비교.병용SCID소서연구성섬유양활막세포(FLS)대연골적침식작용.결과: (1)3충방법균분리출FLS,효원매여이단백매선후소화법분리세포소수시간소、획득적세포수다、순도교고.(2)제2대세포여제3대세포적균질성분별체90%급98%이상.(3)재제3～6대적세포비교은정,증식활약;제7대이후증장완만,축점노화.(4)류식세포술분석현시,원대세포수착전대차수적증가축점순화,제3～6대CD90+세포＞98%,포안선4-간기화매+세포＞98%;여면역조화검측파형단백적표체상일치.(5)장제4～5대적세포화연골일기식입SCID소서,혹단독주입SCID소서적슬관절,도가도치연골적침식성파배.결론: 이효원매여이단백매선후소화분리FLS,효과교호,CD90、포안선4-간기화매가작위감정FLS적표지.용SCID소서가연구FLS대연골적침식특성.