农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
333-336
,共4页
尹军团%洪玉枝%郑烈生%刘子铎
尹軍糰%洪玉枝%鄭烈生%劉子鐸
윤군단%홍옥지%정렬생%류자탁
球形芽胞杆菌%S-腺苷甲硫氨酸合成酶%克隆%表达
毬形芽胞桿菌%S-腺苷甲硫氨痠閤成酶%剋隆%錶達
구형아포간균%S-선감갑류안산합성매%극륭%표체
根据S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因核苷酸序列的保守性,利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)基因组中SAMS序列信息设计引物.通过PCR扩增出球形芽胞杆菌(Bacillus sphaericus)SAMS基因,插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pGEX-6P-1,获得重组质粒pGEX-SAM.序列分析表明,来自球形芽胞杆菌的SAMS与大肠杆菌(K02129)、枯草芽胞杆菌(U52812)、酿酒酵母(U17246)、小鼠(J05571)和人(BC018359)的SAMS基因,分别有63.9%、75.4%、58.8%、59.1%和55.7%的同源性.由于一级结构存在明显的差异,将该重组的质粒转入大肠杆菌DH5α并成功地表达了SAMS.通过亲和层析纯化出球形芽胞杆菌的SAMS,SDS-PAGE分析显示蛋白分子量为43 kD.HPLC对SAMS的活性分析表明,该酶可催化ATP和蛋氨酸形成S-腺苷甲硫氨酸(SAM).
根據S-腺苷甲硫氨痠閤成酶(SAMS)基因覈苷痠序列的保守性,利用囌雲金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)基因組中SAMS序列信息設計引物.通過PCR擴增齣毬形芽胞桿菌(Bacillus sphaericus)SAMS基因,插入大腸桿菌(Escherichia coli)錶達載體pGEX-6P-1,穫得重組質粒pGEX-SAM.序列分析錶明,來自毬形芽胞桿菌的SAMS與大腸桿菌(K02129)、枯草芽胞桿菌(U52812)、釀酒酵母(U17246)、小鼠(J05571)和人(BC018359)的SAMS基因,分彆有63.9%、75.4%、58.8%、59.1%和55.7%的同源性.由于一級結構存在明顯的差異,將該重組的質粒轉入大腸桿菌DH5α併成功地錶達瞭SAMS.通過親和層析純化齣毬形芽胞桿菌的SAMS,SDS-PAGE分析顯示蛋白分子量為43 kD.HPLC對SAMS的活性分析錶明,該酶可催化ATP和蛋氨痠形成S-腺苷甲硫氨痠(SAM).
근거S-선감갑류안산합성매(SAMS)기인핵감산서렬적보수성,이용소운금아포간균(Bacillus thuringiensis)기인조중SAMS서렬신식설계인물.통과PCR확증출구형아포간균(Bacillus sphaericus)SAMS기인,삽입대장간균(Escherichia coli)표체재체pGEX-6P-1,획득중조질립pGEX-SAM.서렬분석표명,래자구형아포간균적SAMS여대장간균(K02129)、고초아포간균(U52812)、양주효모(U17246)、소서(J05571)화인(BC018359)적SAMS기인,분별유63.9%、75.4%、58.8%、59.1%화55.7%적동원성.유우일급결구존재명현적차이,장해중조적질립전입대장간균DH5α병성공지표체료SAMS.통과친화층석순화출구형아포간균적SAMS,SDS-PAGE분석현시단백분자량위43 kD.HPLC대SAMS적활성분석표명,해매가최화ATP화단안산형성S-선감갑류안산(SAM).
