CAJ | 학술논문

目的:观察在脱细胞生物瓣支架上种植自体内皮细胞后完成体外构建生物组织工程瓣的可行性.方法:实验于2002-12/2004-12在中国医学科学院阜外心血管病医院先心病研究室和解放军军事医学科学院全军造血干细胞中心实验室完成.①骨髓样品取自军事医学科学院附属医院全军造血干细胞移植中心的健康成人献髓员,从正常成人骨髓中分离骨髓基质细胞进行定向培养和扩增其中的内皮细胞.②十二烷基硫酸钠脱去成人主动脉带瓣管道表面的内皮细胞后作为支架材料;脱细胞的同种生物瓣支架在无菌条件下,剪切成0.8 cm×0.8 cm的大小,种子细胞选择人骨髓基质细胞体外定向培养的内皮细胞,高密度(＞105cm-2)种植于瓣膜支架上静态培养20 d.③分别在静态培养的第7,14,20天结束时取瓣膜片用0.5%硝酸银染色行立体显微镜和扫描电镜观察、摄片.瓣膜被内皮细胞覆盖的面积用百分数表示,以确定其再内皮化率.结果:①5.0×105个骨髓基质细胞体外定向培养的内皮细胞共传8代,最后获得了6.0×1~个内皮细胞,扩增了约1.2×104倍,可以满足高密度种植内皮细胞的需求.②0.03%十二烷基硫酸钠完全脱去了同种生物瓣表面的内皮细胞,而瓣膜的细胞外基质成份在脱细胞前后均无明显变化,其形态学结构保持良好.③内皮细胞与支架复合体静态培养第7,14,20天,再内皮化率分别为65%、85%和90%.结论:骨髓基质细胞定向培养的内皮细胞,经扩增后是瓣膜组织工程研究中种子细胞的又一来源;静态培养条件下基本实现了生物组织工程瓣体外构建的目标,为进一步脉动流培养以及动物实验提供了材料基础.
목적:관찰재탈세포생물판지가상충식자체내피세포후완성체외구건생물조직공정판적가행성.방법:실험우2002-12/2004-12재중국의학과학원부외심혈관병의원선심병연구실화해방군군사의학과학원전군조혈간세포중심실험실완성.①골수양품취자군사의학과학원부속의원전군조혈간세포이식중심적건강성인헌수원,종정상성인골수중분리골수기질세포진행정향배양화확증기중적내피세포.②십이완기류산납탈거성인주동맥대판관도표면적내피세포후작위지가재료;탈세포적동충생물판지가재무균조건하,전절성0.8 cm×0.8 cm적대소,충자세포선택인골수기질세포체외정향배양적내피세포,고밀도(＞105cm-2)충식우판막지가상정태배양20 d.③분별재정태배양적제7,14,20천결속시취판막편용0.5%초산은염색행입체현미경화소묘전경관찰、섭편.판막피내피세포복개적면적용백분수표시,이학정기재내피화솔.결과:①5.0×105개골수기질세포체외정향배양적내피세포공전8대,최후획득료6.0×1~개내피세포,확증료약1.2×104배,가이만족고밀도충식내피세포적수구.②0.03%십이완기류산납완전탈거료동충생물판표면적내피세포,이판막적세포외기질성빈재탈세포전후균무명현변화,기형태학결구보지량호.③내피세포여지가복합체정태배양제7,14,20천,재내피화솔분별위65%、85%화90%.결론:골수기질세포정향배양적내피세포,경확증후시판막조직공정연구중충자세포적우일래원;정태배양조건하기본실현료생물조직공정판체외구건적목표,위진일보맥동류배양이급동물실험제공료재료기출.