南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
5期
969-972
,共4页
温宗华%张艳%吴自勍%周新华%韩西群%张文清%赵彤
溫宗華%張豔%吳自勍%週新華%韓西群%張文清%趙彤
온종화%장염%오자경%주신화%한서군%장문청%조동
斑马鱼%原位杂交%探针%cd99l2
斑馬魚%原位雜交%探針%cd99l2
반마어%원위잡교%탐침%cd99l2
目的 制备用于斑马鱼胚胎早期cd99l2基因时空表达检测的地高辛标记RNA探针.方法 设计引物,构建cd99l2/pGM-T重组质粒,用SacII和SalI分别进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6 RNA聚合酶和T7RNA聚合酶转录合成地反义和正义地高辛标记的RNA探针,用整体原位杂交法检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的表达.结果 成功构建了cd99l2/pGM-T重组质粒,体外转录获得反义和正义RNA探针,反义探针杂交检测证实cd99l2基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中中枢神经系统呈现高表达,正义探针未检测到表达信号.结论 本研究制备的反义cd99l2 RNA探针,兼顾了特异性和敏感性,能有效检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的定位表达,而正义探针可以作为阴性对照,为进一步探究cd99l2基因在斑马鱼发育过程中的作用机制奠定了基础.
目的 製備用于斑馬魚胚胎早期cd99l2基因時空錶達檢測的地高辛標記RNA探針.方法 設計引物,構建cd99l2/pGM-T重組質粒,用SacII和SalI分彆進行酶切得到線性化DNA片段,以Sp6 RNA聚閤酶和T7RNA聚閤酶轉錄閤成地反義和正義地高辛標記的RNA探針,用整體原位雜交法檢測斑馬魚胚胎早期cd99l2基因的錶達.結果 成功構建瞭cd99l2/pGM-T重組質粒,體外轉錄穫得反義和正義RNA探針,反義探針雜交檢測證實cd99l2基因在斑馬魚胚胎早期髮育過程中中樞神經繫統呈現高錶達,正義探針未檢測到錶達信號.結論 本研究製備的反義cd99l2 RNA探針,兼顧瞭特異性和敏感性,能有效檢測斑馬魚胚胎早期cd99l2基因的定位錶達,而正義探針可以作為陰性對照,為進一步探究cd99l2基因在斑馬魚髮育過程中的作用機製奠定瞭基礎.
목적 제비용우반마어배태조기cd99l2기인시공표체검측적지고신표기RNA탐침.방법 설계인물,구건cd99l2/pGM-T중조질립,용SacII화SalI분별진행매절득도선성화DNA편단,이Sp6 RNA취합매화T7RNA취합매전록합성지반의화정의지고신표기적RNA탐침,용정체원위잡교법검측반마어배태조기cd99l2기인적표체.결과 성공구건료cd99l2/pGM-T중조질립,체외전록획득반의화정의RNA탐침,반의탐침잡교검측증실cd99l2기인재반마어배태조기발육과정중중추신경계통정현고표체,정의탐침미검측도표체신호.결론 본연구제비적반의cd99l2 RNA탐침,겸고료특이성화민감성,능유효검측반마어배태조기cd99l2기인적정위표체,이정의탐침가이작위음성대조,위진일보탐구cd99l2기인재반마어발육과정중적작용궤제전정료기출.
