生物医学工程与临床
生物醫學工程與臨床
생물의학공정여림상
BIOMEDICAL ENGINEERING AND CLINICAL MEDICINE
2011年
2期
178-182,封2
,共6页
宋丽萍%楼莎%朱敦皖%刘兰霞%张海玲%董霞%董庭婷%冷希岗
宋麗萍%樓莎%硃敦皖%劉蘭霞%張海玲%董霞%董庭婷%冷希崗
송려평%루사%주돈환%류란하%장해령%동하%동정정%랭희강
组织因子途径抑制因子%绿色荧光蛋白%双顺反子表达载体%血管再狭窄
組織因子途徑抑製因子%綠色熒光蛋白%雙順反子錶達載體%血管再狹窄
조직인자도경억제인자%록색형광단백%쌍순반자표체재체%혈관재협착
目的:构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 313细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体.方法:以含有全长DNA的plR ES-TFPI为模板,多聚酶链反应(PCR)扩增TFPI全长cDNA,经酶切后插入到pIRES2-AcGFPl-Nuc载体中,构建成双顺反子真核表达载体,重组质粒经酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFPl-Nuc-TFPI.将其转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达,以RT-PCR检测TFPI在细胞内的表达.结果:经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内GFP的表达;RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高.结论:成功构建了包括TFPI和GFP的真核双表达载体,并使其在NIH3T3细胞中顺利表达.
目的:構建含人組織因子途徑抑製因子(TFPI)和綠色熒光蛋白(GFP)基因的雙順反子真覈錶達載體,併驗證其在NIH 313細胞中的錶達,為血管再狹窄的防治提供一箇具有示蹤和治療雙重作用的有效載體.方法:以含有全長DNA的plR ES-TFPI為模闆,多聚酶鏈反應(PCR)擴增TFPI全長cDNA,經酶切後插入到pIRES2-AcGFPl-Nuc載體中,構建成雙順反子真覈錶達載體,重組質粒經酶切圖譜分析、PCR擴增及測序鑒定後命名為pIRES2-AcGFPl-Nuc-TFPI.將其轉染NIH3T3細胞,採用熒光顯微鏡觀察GFP在細胞中的錶達,以RT-PCR檢測TFPI在細胞內的錶達.結果:經酶切圖譜分析、PCR擴增及DNA測序證實雙順反子真覈錶達載體構建正確;熒光顯微鏡可觀察到細胞內GFP的錶達;RT-PCR證實經TFPI基因轉染的細胞內TFPI mRNA錶達增高.結論:成功構建瞭包括TFPI和GFP的真覈雙錶達載體,併使其在NIH3T3細胞中順利錶達.
목적:구건함인조직인자도경억제인자(TFPI)화록색형광단백(GFP)기인적쌍순반자진핵표체재체,병험증기재NIH 313세포중적표체,위혈관재협착적방치제공일개구유시종화치료쌍중작용적유효재체.방법:이함유전장DNA적plR ES-TFPI위모판,다취매련반응(PCR)확증TFPI전장cDNA,경매절후삽입도pIRES2-AcGFPl-Nuc재체중,구건성쌍순반자진핵표체재체,중조질립경매절도보분석、PCR확증급측서감정후명명위pIRES2-AcGFPl-Nuc-TFPI.장기전염NIH3T3세포,채용형광현미경관찰GFP재세포중적표체,이RT-PCR검측TFPI재세포내적표체.결과:경매절도보분석、PCR확증급DNA측서증실쌍순반자진핵표체재체구건정학;형광현미경가관찰도세포내GFP적표체;RT-PCR증실경TFPI기인전염적세포내TFPI mRNA표체증고.결론:성공구건료포괄TFPI화GFP적진핵쌍표체재체,병사기재NIH3T3세포중순리표체.
