中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2011年
12期
71-75
,共5页
盖仁华%王衡%郎跃深%李广兴%张瑞莉%马德星%张国庆%杨贵君
蓋仁華%王衡%郎躍深%李廣興%張瑞莉%馬德星%張國慶%楊貴君
개인화%왕형%랑약심%리엄흥%장서리%마덕성%장국경%양귀군
白细胞介素-2%原核表达%多克隆抗体
白細胞介素-2%原覈錶達%多剋隆抗體
백세포개소-2%원핵표체%다극륭항체
根据GenBank发表的牛白细胞介素2(BoIL-2)基因序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增出重组牛白细胞介素2(rBoIL-2)基因.将克隆片段与pMD18-T载体连接,并经过酶切及PCR鉴定,测序结果显示,克隆的BoIL-2基因与GenBank发表的BoIL-2基因序列同源性为98.7％.将测序正确的克隆片段与pET30a(+)载体连接,构建重组表达质粒pET30a(+ )-rBoIL-2,通过双酶切及PCR鉴定阳性的重组质粒进行序列测定后在大肠杆菌的表达,分子质量约为23.49 ku；表达产物主要分布在包涵体中.Western blotting证实所得到的重组蛋白为BoIL-2重组蛋白.用镍离子亲和树脂对所得的BoIL-2重组蛋白进行纯化,并免疫新西兰兔成功制备兔抗rBoIL-2多克隆抗体,为下阶段的研究提供了重要的试验材料.
根據GenBank髮錶的牛白細胞介素2(BoIL-2)基因序列,設計1對特異性引物,應用RT-PCR技術擴增齣重組牛白細胞介素2(rBoIL-2)基因.將剋隆片段與pMD18-T載體連接,併經過酶切及PCR鑒定,測序結果顯示,剋隆的BoIL-2基因與GenBank髮錶的BoIL-2基因序列同源性為98.7％.將測序正確的剋隆片段與pET30a(+)載體連接,構建重組錶達質粒pET30a(+ )-rBoIL-2,通過雙酶切及PCR鑒定暘性的重組質粒進行序列測定後在大腸桿菌的錶達,分子質量約為23.49 ku；錶達產物主要分佈在包涵體中.Western blotting證實所得到的重組蛋白為BoIL-2重組蛋白.用鎳離子親和樹脂對所得的BoIL-2重組蛋白進行純化,併免疫新西蘭兔成功製備兔抗rBoIL-2多剋隆抗體,為下階段的研究提供瞭重要的試驗材料.
근거GenBank발표적우백세포개소2(BoIL-2)기인서렬,설계1대특이성인물,응용RT-PCR기술확증출중조우백세포개소2(rBoIL-2)기인.장극륭편단여pMD18-T재체련접,병경과매절급PCR감정,측서결과현시,극륭적BoIL-2기인여GenBank발표적BoIL-2기인서렬동원성위98.7％.장측서정학적극륭편단여pET30a(+)재체련접,구건중조표체질립pET30a(+ )-rBoIL-2,통과쌍매절급PCR감정양성적중조질립진행서렬측정후재대장간균적표체,분자질량약위23.49 ku；표체산물주요분포재포함체중.Western blotting증실소득도적중조단백위BoIL-2중조단백.용얼리자친화수지대소득적BoIL-2중조단백진행순화,병면역신서란토성공제비토항rBoIL-2다극륭항체,위하계단적연구제공료중요적시험재료.
