实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2011年
21期
1664-1667
,共4页
李兴花%何敏%于艳辉%陈宁%卢思产
李興花%何敏%于豔輝%陳寧%盧思產
리흥화%하민%우염휘%진저%로사산
RNA干扰%调节性T淋巴细胞%MLL1基因%转化生长因子-β1
RNA榦擾%調節性T淋巴細胞%MLL1基因%轉化生長因子-β1
RNA간우%조절성T림파세포%MLL1기인%전화생장인자-β1
目的 探讨小干扰RNA( siRNA)对体外人CD4+ CD25-T淋巴细胞MLL1基因表达的抑制效果及体外转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导调节性T淋巴细胞(iTreg)的影响,为治疗与Treg失衡相关的临床疾病提供理论基础.方法 采用免疫磁珠分选方法从健康人外周血中分离出CD4+ CD25-T淋巴细胞(纯度＞85％).MLL1基因的SET区对组蛋白3上的第4个赖氨酸位点的甲基化起重要作用,针对其设计并合成了不同的siRNAs,分别为带绿色荧光的siRNA( siRNA-FAM)、3个实验组(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3)与1个阴性对照组(siRNA-NC).采用脂质体法转染分选后培养24h的人CD4+ CD25-T淋巴细胞.先转染siRNA-FAM,于转染后的6h,用荧光显微镜观察siRNA的转染效率,寻找最佳的转染条件.按照上述转染条件转染siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-NC.于转染后的48 h,每组取2×106个细胞,提取细胞内RNA,然后反转录为cDNA,用聚合酶链反应扩增该片段,用琼脂糖凝胶检测扩增后的DNA.在MLL1基因表达受到抑制的情况下,采用流式细胞术检测TGF-β1诱导72 h iTreg的比例.结果 当siRNA为100 pmol,脂质体为5×10-6L时,siRNA的转染效率最高为(50.80 ±0.61)％.该实验条件下,发现实验组siRNA-2对MLL1基因mRNA较对照组有明显削弱作用(F=5.820,P＜0.05).在MLL1基因表达削弱的情况下,TGF-β1诱导72 h iTreg比例有明显降低(F=4.046,P＜0.05).结论 siRNA可以有效抑制人CD4+ CD25-T淋巴细胞中MLL1基因的表达,找到了具有较高转染效率的siRNA.TGF-β1体外诱导的iTreg受核因子MLL1的调节.
目的 探討小榦擾RNA( siRNA)對體外人CD4+ CD25-T淋巴細胞MLL1基因錶達的抑製效果及體外轉化生長因子-β1(TGF-β1)誘導調節性T淋巴細胞(iTreg)的影響,為治療與Treg失衡相關的臨床疾病提供理論基礎.方法 採用免疫磁珠分選方法從健康人外週血中分離齣CD4+ CD25-T淋巴細胞(純度＞85％).MLL1基因的SET區對組蛋白3上的第4箇賴氨痠位點的甲基化起重要作用,針對其設計併閤成瞭不同的siRNAs,分彆為帶綠色熒光的siRNA( siRNA-FAM)、3箇實驗組(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3)與1箇陰性對照組(siRNA-NC).採用脂質體法轉染分選後培養24h的人CD4+ CD25-T淋巴細胞.先轉染siRNA-FAM,于轉染後的6h,用熒光顯微鏡觀察siRNA的轉染效率,尋找最佳的轉染條件.按照上述轉染條件轉染siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-NC.于轉染後的48 h,每組取2×106箇細胞,提取細胞內RNA,然後反轉錄為cDNA,用聚閤酶鏈反應擴增該片段,用瓊脂糖凝膠檢測擴增後的DNA.在MLL1基因錶達受到抑製的情況下,採用流式細胞術檢測TGF-β1誘導72 h iTreg的比例.結果 噹siRNA為100 pmol,脂質體為5×10-6L時,siRNA的轉染效率最高為(50.80 ±0.61)％.該實驗條件下,髮現實驗組siRNA-2對MLL1基因mRNA較對照組有明顯削弱作用(F=5.820,P＜0.05).在MLL1基因錶達削弱的情況下,TGF-β1誘導72 h iTreg比例有明顯降低(F=4.046,P＜0.05).結論 siRNA可以有效抑製人CD4+ CD25-T淋巴細胞中MLL1基因的錶達,找到瞭具有較高轉染效率的siRNA.TGF-β1體外誘導的iTreg受覈因子MLL1的調節.
목적 탐토소간우RNA( siRNA)대체외인CD4+ CD25-T림파세포MLL1기인표체적억제효과급체외전화생장인자-β1(TGF-β1)유도조절성T림파세포(iTreg)적영향,위치료여Treg실형상관적림상질병제공이론기출.방법 채용면역자주분선방법종건강인외주혈중분리출CD4+ CD25-T림파세포(순도＞85％).MLL1기인적SET구대조단백3상적제4개뢰안산위점적갑기화기중요작용,침대기설계병합성료불동적siRNAs,분별위대록색형광적siRNA( siRNA-FAM)、3개실험조(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3)여1개음성대조조(siRNA-NC).채용지질체법전염분선후배양24h적인CD4+ CD25-T림파세포.선전염siRNA-FAM,우전염후적6h,용형광현미경관찰siRNA적전염효솔,심조최가적전염조건.안조상술전염조건전염siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-NC.우전염후적48 h,매조취2×106개세포,제취세포내RNA,연후반전록위cDNA,용취합매련반응확증해편단,용경지당응효검측확증후적DNA.재MLL1기인표체수도억제적정황하,채용류식세포술검측TGF-β1유도72 h iTreg적비례.결과 당siRNA위100 pmol,지질체위5×10-6L시,siRNA적전염효솔최고위(50.80 ±0.61)％.해실험조건하,발현실험조siRNA-2대MLL1기인mRNA교대조조유명현삭약작용(F=5.820,P＜0.05).재MLL1기인표체삭약적정황하,TGF-β1유도72 h iTreg비례유명현강저(F=4.046,P＜0.05).결론 siRNA가이유효억제인CD4+ CD25-T림파세포중MLL1기인적표체,조도료구유교고전염효솔적siRNA.TGF-β1체외유도적iTreg수핵인자MLL1적조절.
