安徽农业大学学报
安徽農業大學學報
안휘농업대학학보
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL UNIVERSITY
2004年
1期
87-91
,共5页
许发芝%仲大莲%刘玉华%余为一%李槿年%曾明华
許髮芝%仲大蓮%劉玉華%餘為一%李槿年%曾明華
허발지%중대련%류옥화%여위일%리근년%증명화
鸡IL-2基因%构建%表达
鷄IL-2基因%構建%錶達
계IL-2기인%구건%표체
利用一对自行设计的引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从ConA诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素2(IL-2)基因片段,其长度为439 bp,经酶切鉴定,初步确定为鸡IL-2基因.再将该IL-2基因片段定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经DNA序列鉴定,表明构建的重组质粒含有IL-2基因,该基因的cDNA序列与Sundick报道的结果基本一致.然后,将IL-2基因片段插入原核表达载体pGEX-4T-1,并导入菌株BL21, 经诱导培养、蛋白提取和SDS-PAGE,获得分子量约为42 000的蛋白条带,表明所克隆的鸡IL-2基因在原核细胞中得到表达.
利用一對自行設計的引物,通過反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR),從ConA誘導的5週齡SPF鷄脾細胞中擴增齣鷄白細胞介素2(IL-2)基因片段,其長度為439 bp,經酶切鑒定,初步確定為鷄IL-2基因.再將該IL-2基因片段定嚮插入真覈錶達質粒pcDNA3中,經DNA序列鑒定,錶明構建的重組質粒含有IL-2基因,該基因的cDNA序列與Sundick報道的結果基本一緻.然後,將IL-2基因片段插入原覈錶達載體pGEX-4T-1,併導入菌株BL21, 經誘導培養、蛋白提取和SDS-PAGE,穫得分子量約為42 000的蛋白條帶,錶明所剋隆的鷄IL-2基因在原覈細胞中得到錶達.
이용일대자행설계적인물,통과반전록-취합매련반응(RT-PCR),종ConA유도적5주령SPF계비세포중확증출계백세포개소2(IL-2)기인편단,기장도위439 bp,경매절감정,초보학정위계IL-2기인.재장해IL-2기인편단정향삽입진핵표체질립pcDNA3중,경DNA서렬감정,표명구건적중조질립함유IL-2기인,해기인적cDNA서렬여Sundick보도적결과기본일치.연후,장IL-2기인편단삽입원핵표체재체pGEX-4T-1,병도입균주BL21, 경유도배양、단백제취화SDS-PAGE,획득분자량약위42 000적단백조대,표명소극륭적계IL-2기인재원핵세포중득도표체.
