科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2004年
4期
363-369
,共7页
徐小静%曹志翔%刘国琴%Madan K.Bhattacharrya%任东涛
徐小靜%曹誌翔%劉國琴%Madan K.Bhattacharrya%任東濤
서소정%조지상%류국금%Madan K.Bhattacharrya%임동도
拟南芥%AtPLC6%克隆%原核表达%冷胁迫
擬南芥%AtPLC6%剋隆%原覈錶達%冷脅迫
의남개%AtPLC6%극륭%원핵표체%랭협박
利用文库筛选和RT-PCR方法,从拟南芥中克隆到长度为1954 bp,包括全长1734 bp编码区的AtPLC6 cDNA,推测其编码一含有578个氨基酸的多肽,其等电点为7.24,分子量为66251.84 Da.在GenBank中进行序列比对发现,AtPLC6为一新发现的拟南芥PI-PLC基因.对推测的氨基酸序列结构的分析表明,AtPLC6具有EF手性结构、X结构域、Y结构域和C2结构域,与植物中已知的其他磷酸肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)在结构上相似,类似于动物中典型的δ-型磷酸肌醇特异性磷脂酶.将AtPLC6的编码区序列插入原核表达载体后进行了原核表达,纯化的AtPLC6重组蛋白可水解PIP2产生IP3和DAG,且水解活性呈明显的钙依赖特性,反应的最适Ca2+浓度为10 μmol/L.Northern分析结果表明,在检测的根、茎、叶、花、果和幼苗中均有AtPLC6mRNA的转录,但转录水平较低.用ABA,NaCl,冷和热等胁迫处理的实验表明,AtPLC6 mRNA的转录受到冷胁迫的诱导,而受ABA,NaCl和热等胁迫影响较小,推测AtPLC6可能参与了植株对冷胁迫的响应.
利用文庫篩選和RT-PCR方法,從擬南芥中剋隆到長度為1954 bp,包括全長1734 bp編碼區的AtPLC6 cDNA,推測其編碼一含有578箇氨基痠的多肽,其等電點為7.24,分子量為66251.84 Da.在GenBank中進行序列比對髮現,AtPLC6為一新髮現的擬南芥PI-PLC基因.對推測的氨基痠序列結構的分析錶明,AtPLC6具有EF手性結構、X結構域、Y結構域和C2結構域,與植物中已知的其他燐痠肌醇特異性燐脂酶C(PI-PLC)在結構上相似,類似于動物中典型的δ-型燐痠肌醇特異性燐脂酶.將AtPLC6的編碼區序列插入原覈錶達載體後進行瞭原覈錶達,純化的AtPLC6重組蛋白可水解PIP2產生IP3和DAG,且水解活性呈明顯的鈣依賴特性,反應的最適Ca2+濃度為10 μmol/L.Northern分析結果錶明,在檢測的根、莖、葉、花、果和幼苗中均有AtPLC6mRNA的轉錄,但轉錄水平較低.用ABA,NaCl,冷和熱等脅迫處理的實驗錶明,AtPLC6 mRNA的轉錄受到冷脅迫的誘導,而受ABA,NaCl和熱等脅迫影響較小,推測AtPLC6可能參與瞭植株對冷脅迫的響應.
이용문고사선화RT-PCR방법,종의남개중극륭도장도위1954 bp,포괄전장1734 bp편마구적AtPLC6 cDNA,추측기편마일함유578개안기산적다태,기등전점위7.24,분자량위66251.84 Da.재GenBank중진행서렬비대발현,AtPLC6위일신발현적의남개PI-PLC기인.대추측적안기산서렬결구적분석표명,AtPLC6구유EF수성결구、X결구역、Y결구역화C2결구역,여식물중이지적기타린산기순특이성린지매C(PI-PLC)재결구상상사,유사우동물중전형적δ-형린산기순특이성린지매.장AtPLC6적편마구서렬삽입원핵표체재체후진행료원핵표체,순화적AtPLC6중조단백가수해PIP2산생IP3화DAG,차수해활성정명현적개의뢰특성,반응적최괄Ca2+농도위10 μmol/L.Northern분석결과표명,재검측적근、경、협、화、과화유묘중균유AtPLC6mRNA적전록,단전록수평교저.용ABA,NaCl,랭화열등협박처리적실험표명,AtPLC6 mRNA적전록수도랭협박적유도,이수ABA,NaCl화열등협박영향교소,추측AtPLC6가능삼여료식주대랭협박적향응.
