南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2006年
1期
82-85
,共4页
徐劲松%蔡绍曦%邹飞%佟万成%万为人%赵海金
徐勁鬆%蔡紹晞%鄒飛%佟萬成%萬為人%趙海金
서경송%채소희%추비%동만성%만위인%조해금
哮喘%嗜酸细胞%抑制消减杂交%基因文库
哮喘%嗜痠細胞%抑製消減雜交%基因文庫
효천%기산세포%억제소감잡교%기인문고
目的构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库.方法采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,随机挑取100个白色克隆用菌落PCR进行鉴定.结果扩增消减cDNA文库获得3000余个白色阳性克隆,随机挑取100个白色克隆用PCR进行扩增,90%的克隆中均有200～600 bp的插入片段,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段.结论用SSH法及T/A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选、克隆哮喘病人嗜酸细胞差异表达的新基因奠定了基础.
目的構建哮喘病人治療前後嗜痠細胞差異錶達基因的消減cDNA文庫.方法採用新近建立的抑製消減雜交方法,哮喘治療前後的嗜痠細胞為試驗和對比材料,分離哮喘病人嗜痠細胞中差異錶達基因的cDNA片段,將其與T載體進行T/A連接構建文庫,將連接產物用氯化鈣轉化法轉化大腸桿菌進行文庫擴增和藍白斑篩選,隨機挑取100箇白色剋隆用菌落PCR進行鑒定.結果擴增消減cDNA文庫穫得3000餘箇白色暘性剋隆,隨機挑取100箇白色剋隆用PCR進行擴增,90%的剋隆中均有200～600 bp的插入片段,這些片段可能是哮喘嗜痠細胞差異錶達基因的cDNA片段.結論用SSH法及T/A剋隆技術成功構建瞭哮喘病人治療前後嗜痠細胞差異錶達基因消減cDNA文庫,該消減cDNA文庫的建立為進一步篩選、剋隆哮喘病人嗜痠細胞差異錶達的新基因奠定瞭基礎.
목적구건효천병인치료전후기산세포차이표체기인적소감cDNA문고.방법채용신근건립적억제소감잡교방법,효천치료전후적기산세포위시험화대비재료,분리효천병인기산세포중차이표체기인적cDNA편단,장기여T재체진행T/A련접구건문고,장련접산물용록화개전화법전화대장간균진행문고확증화람백반사선,수궤도취100개백색극륭용균락PCR진행감정.결과확증소감cDNA문고획득3000여개백색양성극륭,수궤도취100개백색극륭용PCR진행확증,90%적극륭중균유200～600 bp적삽입편단,저사편단가능시효천기산세포차이표체기인적cDNA편단.결론용SSH법급T/A극륭기술성공구건료효천병인치료전후기산세포차이표체기인소감cDNA문고,해소감cDNA문고적건립위진일보사선、극륭효천병인기산세포차이표체적신기인전정료기출.
