西北农林科技大学学报（自然科学版）
西北農林科技大學學報（自然科學版）
서북농림과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2006年
9期
11-16
,共6页
祝发明%刘辉%曹要玲%杨明明%曹斌云
祝髮明%劉輝%曹要玲%楊明明%曹斌雲
축발명%류휘%조요령%양명명%조빈운
枯草杆菌%Tat途径%β-半乳糖苷酶%基因信号肽
枯草桿菌%Tat途徑%β-半乳糖苷酶%基因信號肽
고초간균%Tat도경%β-반유당감매%기인신호태
从枯草芽孢杆菌1A747菌株基因组克隆AmyX基因信号肽序列,构建枯草芽孢杆菌分泌表达载体pYGAmyX,转化枯草杆菌WB700得WB700(pYGAmyX).采用重叠PCR技术,将AmyX基因信号肽突变,使其N端正电荷增加,H区疏水性降低,利用突变后信号肽序列构建枯草杆菌分泌表达载体pYGMUT,转化枯草杆菌WB700得WB700(pYGMUT).对WB700(pYGAmyX)和WB700(pYGMUT)的表达产物进行检测,研究AmyX基因信号肽突变对枯草杆菌蛋白分泌途径的影响.结果表明,WB700(pYGAmyX)和WB700(pYGMUT均能表达β-半乳糖苷酶,WB700(pYGAmyX)的最高胞外酶活性达2 300 U,WB700(pYGMUT)的最高酶活性达5 200 U.结果表明AmyX基因信号肽突变后构建的表达载体pYGMUT分泌表达β-半乳糖苷酶明显提高,说明β-半乳糖苷酶通过枯草杆菌Tat途径分泌表达.
從枯草芽孢桿菌1A747菌株基因組剋隆AmyX基因信號肽序列,構建枯草芽孢桿菌分泌錶達載體pYGAmyX,轉化枯草桿菌WB700得WB700(pYGAmyX).採用重疊PCR技術,將AmyX基因信號肽突變,使其N耑正電荷增加,H區疏水性降低,利用突變後信號肽序列構建枯草桿菌分泌錶達載體pYGMUT,轉化枯草桿菌WB700得WB700(pYGMUT).對WB700(pYGAmyX)和WB700(pYGMUT)的錶達產物進行檢測,研究AmyX基因信號肽突變對枯草桿菌蛋白分泌途徑的影響.結果錶明,WB700(pYGAmyX)和WB700(pYGMUT均能錶達β-半乳糖苷酶,WB700(pYGAmyX)的最高胞外酶活性達2 300 U,WB700(pYGMUT)的最高酶活性達5 200 U.結果錶明AmyX基因信號肽突變後構建的錶達載體pYGMUT分泌錶達β-半乳糖苷酶明顯提高,說明β-半乳糖苷酶通過枯草桿菌Tat途徑分泌錶達.
종고초아포간균1A747균주기인조극륭AmyX기인신호태서렬,구건고초아포간균분비표체재체pYGAmyX,전화고초간균WB700득WB700(pYGAmyX).채용중첩PCR기술,장AmyX기인신호태돌변,사기N단정전하증가,H구소수성강저,이용돌변후신호태서렬구건고초간균분비표체재체pYGMUT,전화고초간균WB700득WB700(pYGMUT).대WB700(pYGAmyX)화WB700(pYGMUT)적표체산물진행검측,연구AmyX기인신호태돌변대고초간균단백분비도경적영향.결과표명,WB700(pYGAmyX)화WB700(pYGMUT균능표체β-반유당감매,WB700(pYGAmyX)적최고포외매활성체2 300 U,WB700(pYGMUT)적최고매활성체5 200 U.결과표명AmyX기인신호태돌변후구건적표체재체pYGMUT분비표체β-반유당감매명현제고,설명β-반유당감매통과고초간균Tat도경분비표체.
