北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2007年
5期
453-457
,共5页
汤坚强%万远廉%刘玉村%戎龙%汪欣%吴涛%潘义生%朱静
湯堅彊%萬遠廉%劉玉村%戎龍%汪訢%吳濤%潘義生%硃靜
탕견강%만원렴%류옥촌%융룡%왕흔%오도%반의생%주정
因子Ⅶa%结直肠肿瘤%基质金属蛋白酶类%丝裂原激活蛋白激酶类
因子Ⅶa%結直腸腫瘤%基質金屬蛋白酶類%絲裂原激活蛋白激酶類
인자Ⅶa%결직장종류%기질금속단백매류%사렬원격활단백격매류
目的:观察活化凝血Ⅶ因子(actived factor Ⅶ,FⅦa)对大肠癌LoVo细胞系表达基质金属蛋白酶-7(ProMMP-7)的影响,探讨其可能的组织因子信号转导通路.方法 :(1)用Western blot检测100 nmol/L FⅦa刺激LoVo细胞系不同时间点及不同浓度FⅦa刺激LoVo细胞系12 h后细胞ProMMP-7蛋白水平;用Western blot检测5 mg/L组织因子(tissue factor,TF)抗体预孵育LoVo细胞系0.5 h后再给予100 nmol/L FⅦa刺激12 h后细胞ProMMP-7蛋白水平.(2)观察用100 nmol/L FⅦa刺激时丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)各亚通路信号蛋白(包括细胞外信号调节激酶ERK1/2,丝裂原激活蛋白激酶P38及c-Jun-N末端蛋白激酶JNK)磷酸化水平变化.(3)在FⅦa刺激前0.5 h分别加入ERK1/2,P38和JNK信号通路特异阻断剂PD98059,SB203580和SP600125,培养12 h后检测细胞ProMMP-7蛋白的变化.结果 :(1)FⅦa可刺激LoVo系细胞表达ProMMP-7并呈时间依赖性和剂量依赖性,在刺激的12 h左右ProMMP-7达峰值,是正常对照组的5.5±0.6倍(P=0.006);用TF抗体预处理的LoVo细胞系,其FⅦa上调ProMMP-7表达的作用被完全阻断.(2)用100 nmol/L FⅦa刺激LoVo细胞5 min时,MAPKs磷酸化活性蛋白p-ERK1/2和p-P38表达水平开始增加,至10 min时达峰值(分别为对照组的2.2±0.3倍和3.9±0.5倍,P值分别为0.02和0.01),存在时间效应关系,而p-JNK活性无改变(为对照组的1.1±0.1倍).(3)ERK1/2通路阻断剂PD98059及P38通路阻断剂SB203580可部分减少FⅦa上调LoVo细胞系表达ProMMP-7的效应,分别降低了32%±5%(P=0.01)和61%±10%(P=0.009),JNK通路特异性阻断剂SP600125对ProMMP-7的表达无明显影响.结论: FⅦa通过与LoVo细胞表面的TF结合诱导ProMMP-7的表达,并呈时间依赖性和剂量依赖性;ERK1/2和P38 MAPKs亚通路参与LoVo细胞TF信号转导通路并与TF/FⅦa调控ProMMP-7表达有关.
目的:觀察活化凝血Ⅶ因子(actived factor Ⅶ,FⅦa)對大腸癌LoVo細胞繫錶達基質金屬蛋白酶-7(ProMMP-7)的影響,探討其可能的組織因子信號轉導通路.方法 :(1)用Western blot檢測100 nmol/L FⅦa刺激LoVo細胞繫不同時間點及不同濃度FⅦa刺激LoVo細胞繫12 h後細胞ProMMP-7蛋白水平;用Western blot檢測5 mg/L組織因子(tissue factor,TF)抗體預孵育LoVo細胞繫0.5 h後再給予100 nmol/L FⅦa刺激12 h後細胞ProMMP-7蛋白水平.(2)觀察用100 nmol/L FⅦa刺激時絲裂原激活蛋白激酶(MAPKs)各亞通路信號蛋白(包括細胞外信號調節激酶ERK1/2,絲裂原激活蛋白激酶P38及c-Jun-N末耑蛋白激酶JNK)燐痠化水平變化.(3)在FⅦa刺激前0.5 h分彆加入ERK1/2,P38和JNK信號通路特異阻斷劑PD98059,SB203580和SP600125,培養12 h後檢測細胞ProMMP-7蛋白的變化.結果 :(1)FⅦa可刺激LoVo繫細胞錶達ProMMP-7併呈時間依賴性和劑量依賴性,在刺激的12 h左右ProMMP-7達峰值,是正常對照組的5.5±0.6倍(P=0.006);用TF抗體預處理的LoVo細胞繫,其FⅦa上調ProMMP-7錶達的作用被完全阻斷.(2)用100 nmol/L FⅦa刺激LoVo細胞5 min時,MAPKs燐痠化活性蛋白p-ERK1/2和p-P38錶達水平開始增加,至10 min時達峰值(分彆為對照組的2.2±0.3倍和3.9±0.5倍,P值分彆為0.02和0.01),存在時間效應關繫,而p-JNK活性無改變(為對照組的1.1±0.1倍).(3)ERK1/2通路阻斷劑PD98059及P38通路阻斷劑SB203580可部分減少FⅦa上調LoVo細胞繫錶達ProMMP-7的效應,分彆降低瞭32%±5%(P=0.01)和61%±10%(P=0.009),JNK通路特異性阻斷劑SP600125對ProMMP-7的錶達無明顯影響.結論: FⅦa通過與LoVo細胞錶麵的TF結閤誘導ProMMP-7的錶達,併呈時間依賴性和劑量依賴性;ERK1/2和P38 MAPKs亞通路參與LoVo細胞TF信號轉導通路併與TF/FⅦa調控ProMMP-7錶達有關.
목적:관찰활화응혈Ⅶ인자(actived factor Ⅶ,FⅦa)대대장암LoVo세포계표체기질금속단백매-7(ProMMP-7)적영향,탐토기가능적조직인자신호전도통로.방법 :(1)용Western blot검측100 nmol/L FⅦa자격LoVo세포계불동시간점급불동농도FⅦa자격LoVo세포계12 h후세포ProMMP-7단백수평;용Western blot검측5 mg/L조직인자(tissue factor,TF)항체예부육LoVo세포계0.5 h후재급여100 nmol/L FⅦa자격12 h후세포ProMMP-7단백수평.(2)관찰용100 nmol/L FⅦa자격시사렬원격활단백격매(MAPKs)각아통로신호단백(포괄세포외신호조절격매ERK1/2,사렬원격활단백격매P38급c-Jun-N말단단백격매JNK)린산화수평변화.(3)재FⅦa자격전0.5 h분별가입ERK1/2,P38화JNK신호통로특이조단제PD98059,SB203580화SP600125,배양12 h후검측세포ProMMP-7단백적변화.결과 :(1)FⅦa가자격LoVo계세포표체ProMMP-7병정시간의뢰성화제량의뢰성,재자격적12 h좌우ProMMP-7체봉치,시정상대조조적5.5±0.6배(P=0.006);용TF항체예처리적LoVo세포계,기FⅦa상조ProMMP-7표체적작용피완전조단.(2)용100 nmol/L FⅦa자격LoVo세포5 min시,MAPKs린산화활성단백p-ERK1/2화p-P38표체수평개시증가,지10 min시체봉치(분별위대조조적2.2±0.3배화3.9±0.5배,P치분별위0.02화0.01),존재시간효응관계,이p-JNK활성무개변(위대조조적1.1±0.1배).(3)ERK1/2통로조단제PD98059급P38통로조단제SB203580가부분감소FⅦa상조LoVo세포계표체ProMMP-7적효응,분별강저료32%±5%(P=0.01)화61%±10%(P=0.009),JNK통로특이성조단제SP600125대ProMMP-7적표체무명현영향.결론: FⅦa통과여LoVo세포표면적TF결합유도ProMMP-7적표체,병정시간의뢰성화제량의뢰성;ERK1/2화P38 MAPKs아통로삼여LoVo세포TF신호전도통로병여TF/FⅦa조공ProMMP-7표체유관.
