浙江林学院学报
浙江林學院學報
절강림학원학보
JOURNAL OF ZHEJIANG FORESTRY COLLEGE
2008年
2期
186-190
,共5页
曹福亮%王国霞%李广平%花喆斌
曹福亮%王國霞%李廣平%花喆斌
조복량%왕국하%리엄평%화철빈
林木育种学%银杏%ISSR-PCR%反应体系
林木育種學%銀杏%ISSR-PCR%反應體繫
림목육충학%은행%ISSR-PCR%반응체계
为了对影响银杏Gingko biloba简单序列重复区间扩增一聚合酶链式反应(ISSR-PCR)扩增反应体系的因素进行优化,采用ISSR-PCR扩增技术和UVP凝胶电泳成像技术对模板DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等因素进行筛选和优化.筛选优化后的反应条件:Taq酶0.3μg,2μL 10×Buffer(含15 mmol·L-1MgCl2),模板DNA 40 ng,dNTP 0.2 mmol·L-1,引物0.5 μmol·L-1,Mg2+1.5 mmol·L-1.PCR扩增程序:94℃变性5 min,然后进行38个循环:94℃变性30s,48～53℃(根据引物而定)退火30 s,72℃延伸1 min;最后72℃延伸10 min,4℃终止反应.上述反应条件可广泛应用于银杏的遗传多样性分析、遗传育种和转基因等方面的研究.
為瞭對影響銀杏Gingko biloba簡單序列重複區間擴增一聚閤酶鏈式反應(ISSR-PCR)擴增反應體繫的因素進行優化,採用ISSR-PCR擴增技術和UVP凝膠電泳成像技術對模闆DNA濃度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火溫度等因素進行篩選和優化.篩選優化後的反應條件:Taq酶0.3μg,2μL 10×Buffer(含15 mmol·L-1MgCl2),模闆DNA 40 ng,dNTP 0.2 mmol·L-1,引物0.5 μmol·L-1,Mg2+1.5 mmol·L-1.PCR擴增程序:94℃變性5 min,然後進行38箇循環:94℃變性30s,48～53℃(根據引物而定)退火30 s,72℃延伸1 min;最後72℃延伸10 min,4℃終止反應.上述反應條件可廣汎應用于銀杏的遺傳多樣性分析、遺傳育種和轉基因等方麵的研究.
위료대영향은행Gingko biloba간단서렬중복구간확증일취합매련식반응(ISSR-PCR)확증반응체계적인소진행우화,채용ISSR-PCR확증기술화UVP응효전영성상기술대모판DNA농도、Taq매용량、인물용량、dNTP적용량이급퇴화온도등인소진행사선화우화.사선우화후적반응조건:Taq매0.3μg,2μL 10×Buffer(함15 mmol·L-1MgCl2),모판DNA 40 ng,dNTP 0.2 mmol·L-1,인물0.5 μmol·L-1,Mg2+1.5 mmol·L-1.PCR확증정서:94℃변성5 min,연후진행38개순배:94℃변성30s,48～53℃(근거인물이정)퇴화30 s,72℃연신1 min;최후72℃연신10 min,4℃종지반응.상술반응조건가엄범응용우은행적유전다양성분석、유전육충화전기인등방면적연구.
