柯萨奇病毒B组3型VP1蛋白的原核表达及免疫效果研究
가살기병독B조3형VP1단백적원핵표체급면역효과연구
Expression of CVB3 VP1 protein in prokaryotic system and study on its immune effects
  • 万方数据
    中国免疫学杂志 중국면역학잡지
    CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
    2009年 4期 291-294,298 ,共5页

    李伟%蓝佳明%李剑%金玉怀%高志云%揣侠%刘贵霞%张永红%王永祥

    리위%람가명%리검%금옥부%고지운%췌협%류귀하%장영홍%왕영상

    柯萨奇病毒B组%亚单位疫苗%免疫应答%原核表达 柯薩奇病毒B組%亞單位疫苗%免疫應答%原覈錶達
    가살기병독B조%아단위역묘%면역응답%원핵표체
    目的:用原核细胞表达柯萨奇病毒B组3型VP1蛋白并观察其免疫效果.方法:构建原核表达质粒pET-his/VP1,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导VP1蛋白的表达并纯化.BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组.实验组腹腔注射VP1蛋白,对照组注射PBS,每3周免疫1次,共免疫3次.每次免疫后2周取血清,用微量中和试验法检测血清CVB3特异性中和抗体滴度;末次免疫后3周,每组随机取3只小鼠,用细胞计数试剂盒检测淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性;每组另随机抽取3只腹腔注射3LD50CVB3,第7天检测血中病毒滴度;用致死量的CVB3攻击每组剩余12只小鼠,观察免疫保护作用.结果:实验组小鼠血清中和抗体滴度随免疫次数增加而提高(P＜0.05),第3次免疫后中和抗体滴度达70.79±1.31,明显高于PBS对照组(P＜0.05);非特异性淋巴细胞增殖活性亦明显高于PBS组(P＜0.05),但特异性淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性两组间无统计学差别(P＞0.05);CVB3攻击后,实验组小鼠血中病毒滴度显著降低,生存率达33.33%,而PBS组小鼠无存活,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:VP1蛋白可显著增强小鼠的体液免疫应答水平,提高致死量CVB3感染后小鼠的生存率.
    목적:용원핵세포표체가살기병독B조3형VP1단백병관찰기면역효과.방법:구건원핵표체질립pET-his/VP1,전화대장간균BL21(DE3)pLysS,유도VP1단백적표체병순화.BALB/c소서수궤분위실험조화대조조.실험조복강주사VP1단백,대조조주사PBS,매3주면역1차,공면역3차.매차면역후2주취혈청,용미량중화시험법검측혈청CVB3특이성중화항체적도;말차면역후3주,매조수궤취3지소서,용세포계수시제합검측림파세포증식활성화특이성CTL살상활성;매조령수궤추취3지복강주사3LD50CVB3,제7천검측혈중병독적도;용치사량적CVB3공격매조잉여12지소서,관찰면역보호작용.결과:실험조소서혈청중화항체적도수면역차수증가이제고(P＜0.05),제3차면역후중화항체적도체70.79±1.31,명현고우PBS대조조(P＜0.05);비특이성림파세포증식활성역명현고우PBS조(P＜0.05),단특이성림파세포증식활성화CTL살상활성량조간무통계학차별(P＞0.05);CVB3공격후,실험조소서혈중병독적도현저강저,생존솔체33.33%,이PBS조소서무존활,차이유통계학의의(P＜0.05).결론:VP1단백가현저증강소서적체액면역응답수평,제고치사량CVB3감염후소서적생존솔.
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