中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2011年
5期
408-410
,共3页
赵雯%潘志明%耿士忠%康喜龙%方强%丛秋霞%焦新安
趙雯%潘誌明%耿士忠%康喜龍%方彊%叢鞦霞%焦新安
조문%반지명%경사충%강희룡%방강%총추하%초신안
麻鸭%IL-17%原核表达%免疫反应性
痳鴨%IL-17%原覈錶達%免疫反應性
마압%IL-17%원핵표체%면역반응성
为表达麻鸭白介素17(duIL-17),本研究提取ConA刺激的麻鸭脾脏淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增duIL-17基因片段,将该片段插入克隆载体pCR2.1中构建重组质粒pCR2.1-duIL17.将duIL-17基因片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-duIL17,将其转化到大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达.测序结果显示,duIL-17与参考序列(EU366165.1)相比较第174位碱基由C突变为T,并且为沉默突变.SDS-PAGE和western blot分析显示,诱导表达的重组蛋白GST-duIL17主要以包涵体形式存在,分子量大小约为45 ku,duIL-17与抗鸡IL-17抗体具有良好反应性.本研究为制备duIL-17单克隆抗体提供了实验依据.
為錶達痳鴨白介素17(duIL-17),本研究提取ConA刺激的痳鴨脾髒淋巴細胞總RNA,RT-PCR擴增duIL-17基因片段,將該片段插入剋隆載體pCR2.1中構建重組質粒pCR2.1-duIL17.將duIL-17基因片段亞剋隆到原覈錶達載體pGEX-6P-1中,構建重組質粒pGEX-duIL17,將其轉化到大腸桿菌BL21中,IPTG誘導錶達.測序結果顯示,duIL-17與參攷序列(EU366165.1)相比較第174位堿基由C突變為T,併且為沉默突變.SDS-PAGE和western blot分析顯示,誘導錶達的重組蛋白GST-duIL17主要以包涵體形式存在,分子量大小約為45 ku,duIL-17與抗鷄IL-17抗體具有良好反應性.本研究為製備duIL-17單剋隆抗體提供瞭實驗依據.
위표체마압백개소17(duIL-17),본연구제취ConA자격적마압비장림파세포총RNA,RT-PCR확증duIL-17기인편단,장해편단삽입극륭재체pCR2.1중구건중조질립pCR2.1-duIL17.장duIL-17기인편단아극륭도원핵표체재체pGEX-6P-1중,구건중조질립pGEX-duIL17,장기전화도대장간균BL21중,IPTG유도표체.측서결과현시,duIL-17여삼고서렬(EU366165.1)상비교제174위감기유C돌변위T,병차위침묵돌변.SDS-PAGE화western blot분석현시,유도표체적중조단백GST-duIL17주요이포함체형식존재,분자량대소약위45 ku,duIL-17여항계IL-17항체구유량호반응성.본연구위제비duIL-17단극륭항체제공료실험의거.
