江苏大学学报(医学版)
江囌大學學報(醫學版)
강소대학학보(의학판)
ACADEMIC JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY(MEDICINE)
2011年
4期
303-307,封2
,共6页
冷加燕%许文林%沈慧玲%龙璐璐%吴晓君%陈巧云%姚俊
冷加燕%許文林%瀋慧玲%龍璐璐%吳曉君%陳巧雲%姚俊
랭가연%허문림%침혜령%룡로로%오효군%진교운%요준
hYB1基因%MCF-7细胞%腺病毒载体%耐药
hYB1基因%MCF-7細胞%腺病毒載體%耐藥
hYB1기인%MCF-7세포%선병독재체%내약
目的:构建携带人YB1基因的重组腺病毒载体,并观察其对乳腺癌细胞株MCF-7药物敏感性的影响,并分析其可能的机制.方法:设计含有BglⅡ和HindⅢ酶切位点的引物,PCR克隆人YB1基因,插入穿梭载体pAdTrack-CMV,与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠埃希菌BJ5183内同源重组,获得重组子pAdEasy-1-hYB1,转染293A细胞,包装获得含hYB1的重组腺病毒(AdYB1),体外转染MCF-7细胞.采用MTT法分析在As2O3作用下YB1对MCF-7细胞半数抑制浓度(IC50)的影响;采用Annexin V/PI双染法,经流式细胞仪分析在As2O3作用下YB1对MCF-7细胞凋亡的影响.结果:成功构建了含有hYB1基因的腺病毒载体AdYB1,该重组腺病毒能显著提高MCF-7细胞的YB1mRNA及蛋白的表达水平,转染YB1组能够增加MCF-7细胞对AS2O3的IC50值;通过Annexin V/PI检测证实YB1能够抑制早期细胞凋亡.结论:成功构建含有hYB1基因的腺病毒载体AdYB1,能高效感染MCF-7,并通过抑制早期细胞凋亡提高MCF-7细胞对As2O3的耐药性.
目的:構建攜帶人YB1基因的重組腺病毒載體,併觀察其對乳腺癌細胞株MCF-7藥物敏感性的影響,併分析其可能的機製.方法:設計含有BglⅡ和HindⅢ酶切位點的引物,PCR剋隆人YB1基因,插入穿梭載體pAdTrack-CMV,與腺病毒骨架載體pAdEasy-1在大腸埃希菌BJ5183內同源重組,穫得重組子pAdEasy-1-hYB1,轉染293A細胞,包裝穫得含hYB1的重組腺病毒(AdYB1),體外轉染MCF-7細胞.採用MTT法分析在As2O3作用下YB1對MCF-7細胞半數抑製濃度(IC50)的影響;採用Annexin V/PI雙染法,經流式細胞儀分析在As2O3作用下YB1對MCF-7細胞凋亡的影響.結果:成功構建瞭含有hYB1基因的腺病毒載體AdYB1,該重組腺病毒能顯著提高MCF-7細胞的YB1mRNA及蛋白的錶達水平,轉染YB1組能夠增加MCF-7細胞對AS2O3的IC50值;通過Annexin V/PI檢測證實YB1能夠抑製早期細胞凋亡.結論:成功構建含有hYB1基因的腺病毒載體AdYB1,能高效感染MCF-7,併通過抑製早期細胞凋亡提高MCF-7細胞對As2O3的耐藥性.
목적:구건휴대인YB1기인적중조선병독재체,병관찰기대유선암세포주MCF-7약물민감성적영향,병분석기가능적궤제.방법:설계함유BglⅡ화HindⅢ매절위점적인물,PCR극륭인YB1기인,삽입천사재체pAdTrack-CMV,여선병독골가재체pAdEasy-1재대장애희균BJ5183내동원중조,획득중조자pAdEasy-1-hYB1,전염293A세포,포장획득함hYB1적중조선병독(AdYB1),체외전염MCF-7세포.채용MTT법분석재As2O3작용하YB1대MCF-7세포반수억제농도(IC50)적영향;채용Annexin V/PI쌍염법,경류식세포의분석재As2O3작용하YB1대MCF-7세포조망적영향.결과:성공구건료함유hYB1기인적선병독재체AdYB1,해중조선병독능현저제고MCF-7세포적YB1mRNA급단백적표체수평,전염YB1조능구증가MCF-7세포대AS2O3적IC50치;통과Annexin V/PI검측증실YB1능구억제조기세포조망.결론:성공구건함유hYB1기인적선병독재체AdYB1,능고효감염MCF-7,병통과억제조기세포조망제고MCF-7세포대As2O3적내약성.