CAJ | 학술논문

目的:观察腺相关病毒介导人碱性成纤维细胞因子(bFGF)基因转染对人骨髓基质细胞(hMSCs)成骨能力的影响.方法:从健康志愿者全骨髓中分离培养人骨髓基质细胞,体外扩增纯化后随机分为4组.①腺相关病毒介导人碱性成纤维细胞因子(AAV - bFGF)组:培养液中加入人碱性成纤维细胞因子基因重组腺相关病毒1×10100PU/ml,孵育24h后换普通培养液继续培养；②β半乳糖酐酶基因重组腺相关病毒(AAV - LacZ)组:用半乳糖酐酶基因重组腺相关病毒替换bFGF,其余处理与AAV - bFGF组相同；③阳性对照组:培养液中添加地塞米松(1 nmoL/L)、抗坏血酸(10mmol/L)和β-甘油磷酸钠(50mg/L)；④空白对照组:不给予特殊处理.各组细胞处理后2wk,免疫组化观察bFGF表达,Von Kossa染色检测人骨髓基质细胞中骨胶原结节形成,全自动生化分析仪检测培养上清碱性磷酸酶(ALP)活性.结果:经多次换液传代,人骨髓基质细胞呈均一梭形形态.处理后AAV - bFGF组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平,突起减少.AAV - LacZ组和空白对照组形态无明显变化.免疫组化染色见bFGF主要在胞浆内表达,AAV - bFGF组bFGF表达明显强于其他3组.von Kossa染色AAV - bFGF组与阳性对照组可见大量红色骨胶原结节形成,显著多于AAV - LacZ组和空白对照组.培养上清液ALP活性检测AAV - bFGF组与阳性对照组显著高于AAV - LacZ组和空白对照组.结论:基因重组腺相关病毒人碱性成纤维细胞因子转染对人骨髓基质细胞成骨能力具有促进作用.
목적:관찰선상관병독개도인감성성섬유세포인자(bFGF)기인전염대인골수기질세포(hMSCs)성골능력적영향.방법:종건강지원자전골수중분리배양인골수기질세포,체외확증순화후수궤분위4조.①선상관병독개도인감성성섬유세포인자(AAV - bFGF)조:배양액중가입인감성성섬유세포인자기인중조선상관병독1×10100PU/ml,부육24h후환보통배양액계속배양；②β반유당항매기인중조선상관병독(AAV - LacZ)조:용반유당항매기인중조선상관병독체환bFGF,기여처리여AAV - bFGF조상동；③양성대조조:배양액중첨가지새미송(1 nmoL/L)、항배혈산(10mmol/L)화β-감유린산납(50mg/L)；④공백대조조:불급여특수처리.각조세포처리후2wk,면역조화관찰bFGF표체,Von Kossa염색검측인골수기질세포중골효원결절형성,전자동생화분석의검측배양상청감성린산매(ALP)활성.결과:경다차환액전대,인골수기질세포정균일사형형태.처리후AAV - bFGF조여양성대조조세포형태축점추우편평,돌기감소.AAV - LacZ조화공백대조조형태무명현변화.면역조화염색견bFGF주요재포장내표체,AAV - bFGF조bFGF표체명현강우기타3조.von Kossa염색AAV - bFGF조여양성대조조가견대량홍색골효원결절형성,현저다우AAV - LacZ조화공백대조조.배양상청액ALP활성검측AAV - bFGF조여양성대조조현저고우AAV - LacZ조화공백대조조.결론:기인중조선상관병독인감성성섬유세포인자전염대인골수기질세포성골능력구유촉진작용.