蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2012年
2期
249-256
,共8页
马振刚%贾俊杰%陈全梅%黄为%李田%潘国庆%周泽扬
馬振剛%賈俊傑%陳全梅%黃為%李田%潘國慶%週澤颺
마진강%가준걸%진전매%황위%리전%반국경%주택양
家蚕%防御素%BmdefA基因%BmdefB基因%序列特征%表达模式%原核表达
傢蠶%防禦素%BmdefA基因%BmdefB基因%序列特徵%錶達模式%原覈錶達
가잠%방어소%BmdefA기인%BmdefB기인%서렬특정%표체모식%원핵표체
家蚕防御素(defensin)是家蚕抗菌肽家族的主要成员之一,为家蚕先天性免疫的重要效应因子.采用生物信息学方法分析家蚕防御素基因BmdefA、BmdefB的序列中各有2个外显子,2个基因分别定位于家蚕第4号和第13号染色体上；等电点预测BmdefA带有负电荷,属于罕见的阴离子型抗菌肽,而BmdefB带有正电荷,属于常见的阳离子型抗菌肽；预测2个基因编码的成熟肽分子质量均在4 kD左右.用RT-PCR方法检测BmdefA在家蚕整个发育过程中有表达,且在检测的幼虫和成虫各组织中均有表达；BmdefB从幼虫5龄第3天到成虫期表达,雄性表达量高于雌性,且在5龄第3天幼虫的生殖腺、脂肪体和血细胞中高水平表达.家蚕防御素BmdefA、BmdefB具有不同的分子特性和表达特征,暗示它们在家蚕先天免疫过程中可能行使不同的功能,甚至可能具有不同的抗菌机理.构建融合GST标签的家蚕防御素基因原核表达载体,通过在大肠杆菌细胞内诱导表达,获得可溶性的目的蛋白,使用GST亲和层析柱初步纯化表达的融合蛋白并进行Western blotting鉴定,为进一步研究BmdefA、BmdefB的体外活性和抑菌机制奠定基础.
傢蠶防禦素(defensin)是傢蠶抗菌肽傢族的主要成員之一,為傢蠶先天性免疫的重要效應因子.採用生物信息學方法分析傢蠶防禦素基因BmdefA、BmdefB的序列中各有2箇外顯子,2箇基因分彆定位于傢蠶第4號和第13號染色體上；等電點預測BmdefA帶有負電荷,屬于罕見的陰離子型抗菌肽,而BmdefB帶有正電荷,屬于常見的暘離子型抗菌肽；預測2箇基因編碼的成熟肽分子質量均在4 kD左右.用RT-PCR方法檢測BmdefA在傢蠶整箇髮育過程中有錶達,且在檢測的幼蟲和成蟲各組織中均有錶達；BmdefB從幼蟲5齡第3天到成蟲期錶達,雄性錶達量高于雌性,且在5齡第3天幼蟲的生殖腺、脂肪體和血細胞中高水平錶達.傢蠶防禦素BmdefA、BmdefB具有不同的分子特性和錶達特徵,暗示它們在傢蠶先天免疫過程中可能行使不同的功能,甚至可能具有不同的抗菌機理.構建融閤GST標籤的傢蠶防禦素基因原覈錶達載體,通過在大腸桿菌細胞內誘導錶達,穫得可溶性的目的蛋白,使用GST親和層析柱初步純化錶達的融閤蛋白併進行Western blotting鑒定,為進一步研究BmdefA、BmdefB的體外活性和抑菌機製奠定基礎.
가잠방어소(defensin)시가잠항균태가족적주요성원지일,위가잠선천성면역적중요효응인자.채용생물신식학방법분석가잠방어소기인BmdefA、BmdefB적서렬중각유2개외현자,2개기인분별정위우가잠제4호화제13호염색체상；등전점예측BmdefA대유부전하,속우한견적음리자형항균태,이BmdefB대유정전하,속우상견적양리자형항균태；예측2개기인편마적성숙태분자질량균재4 kD좌우.용RT-PCR방법검측BmdefA재가잠정개발육과정중유표체,차재검측적유충화성충각조직중균유표체；BmdefB종유충5령제3천도성충기표체,웅성표체량고우자성,차재5령제3천유충적생식선、지방체화혈세포중고수평표체.가잠방어소BmdefA、BmdefB구유불동적분자특성화표체특정,암시타문재가잠선천면역과정중가능행사불동적공능,심지가능구유불동적항균궤리.구건융합GST표첨적가잠방어소기인원핵표체재체,통과재대장간균세포내유도표체,획득가용성적목적단백,사용GST친화층석주초보순화표체적융합단백병진행Western blotting감정,위진일보연구BmdefA、BmdefB적체외활성화억균궤제전정기출.
