CAJ | 학술논문

通过PCR等基因重组技术,以pKT-215(起源于RSF1010)为载体,构建了带有PR序列(含rhaSR操纵子表达调控元件、rhaR基因、报告基因gst的嵌合操纵子)和PT序列(含rhaSR操纵子表达调控元件及rhaT基因)的二种穿梭表达载体pKT-PTR、pKT-PR.其中,在RhaR基因上游设计和插入了增强的SD序列.首先将pKT-PTR、pKT-PR分别转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同培养基条件下,即含鼠李糖与不舍鼠李糖的培养基中进行表达,紫外分光光度计测定GST蛋白(谷胱甘肽-S-转移酶)的活性.结果表明,含嵌合操纵子的穿梭表达载体能在L-鼠李糖的诱导下表达,gst基因的表达量诱导条件下比非诱导条件下高3倍左右,且表达载体上的rhaT基因并不能提高gst的表达;其次,利用三亲结合的方法将2种表达质粒转入鱼腥藻Anabaena sp.PCC 7120中,抗生素筛选后得到能稳定遗传的转基因藻,并以转基因藻的质粒DNA为模板进行PCR检测.最后,转基因藻GST酶活力分析结果表明,嵌合操纵子PR在蓝藻细胞中的诱导表达效率极低,表达条件还需进一步优化.尝试将诱导型的操纵子转入蓝藻,具有潜在的应用价值.
통과PCR등기인중조기술,이pKT-215(기원우RSF1010)위재체,구건료대유PR서렬(함rhaSR조종자표체조공원건、rhaR기인、보고기인gst적감합조종자)화PT서렬(함rhaSR조종자표체조공원건급rhaT기인)적이충천사표체재체pKT-PTR、pKT-PR.기중,재RhaR기인상유설계화삽입료증강적SD서렬.수선장pKT-PTR、pKT-PR분별전화입대장간균BL21(DE3)중,재불동배양기조건하,즉함서리당여불사서리당적배양기중진행표체,자외분광광도계측정GST단백(곡광감태-S-전이매)적활성.결과표명,함감합조종자적천사표체재체능재L-서리당적유도하표체,gst기인적표체량유도조건하비비유도조건하고3배좌우,차표체재체상적rhaT기인병불능제고gst적표체;기차,이용삼친결합적방법장2충표체질립전입어성조Anabaena sp.PCC 7120중,항생소사선후득도능은정유전적전기인조,병이전기인조적질립DNA위모판진행PCR검측.최후,전기인조GST매활력분석결과표명,감합조종자PR재람조세포중적유도표체효솔겁저,표체조건환수진일보우화.상시장유도형적조종자전입람조,구유잠재적응용개치.