实用医学杂志
實用醫學雜誌
실용의학잡지
THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE
2006年
20期
2331-2334
,共4页
贫血%肾功能衰竭,慢性%红细胞生成素,重组%四环素调控系统%基因治疗
貧血%腎功能衰竭,慢性%紅細胞生成素,重組%四環素調控繫統%基因治療
빈혈%신공능쇠갈,만성%홍세포생성소,중조%사배소조공계통%기인치료
目的:克隆、构建、鉴定重组人促红细胞生成素(rhEPO)基因四环素调控真核表达载体;探讨四环素系统对rhEPO基因表达的调控.方法:以含rhEPO全长cDNA的CHO细胞为模板,通过RT-PCR方法扩增出rhEPO基因,将其克隆到真核表达载体pTRE2hyg的多克隆位点,构建成pTRE2hyyg-EPO,进行酶切及测序鉴定.将pTRE2hyg-EPO及Tet-On质粒转导入SD大鼠骨骼肌细胞,用RT-PCR、Western印迹实验和半固体细胞培养实验检测rhEPO基因在大鼠骨骼肌内的表达和蛋白的活性,并观察四环素系统对EPO表达的调控作用.结果:(1)成功构建了四环素调控真核表达质粒pTRE2hyg-EPO,经测序鉴定与所需EPO基因序列一致.(2)rhEPO基因可以在大鼠骨骼肌原代细胞中表达,并受四环素调控系统的控制.生成的EPO具有生物活性,可明显刺激骨髓红系细胞的生长.结论:在细胞水平四环素系统可控制转导的EPO基因的表达,并且生成有生物活性的EPO,达到基因治疗的要求.
目的:剋隆、構建、鑒定重組人促紅細胞生成素(rhEPO)基因四環素調控真覈錶達載體;探討四環素繫統對rhEPO基因錶達的調控.方法:以含rhEPO全長cDNA的CHO細胞為模闆,通過RT-PCR方法擴增齣rhEPO基因,將其剋隆到真覈錶達載體pTRE2hyg的多剋隆位點,構建成pTRE2hyyg-EPO,進行酶切及測序鑒定.將pTRE2hyg-EPO及Tet-On質粒轉導入SD大鼠骨骼肌細胞,用RT-PCR、Western印跡實驗和半固體細胞培養實驗檢測rhEPO基因在大鼠骨骼肌內的錶達和蛋白的活性,併觀察四環素繫統對EPO錶達的調控作用.結果:(1)成功構建瞭四環素調控真覈錶達質粒pTRE2hyg-EPO,經測序鑒定與所需EPO基因序列一緻.(2)rhEPO基因可以在大鼠骨骼肌原代細胞中錶達,併受四環素調控繫統的控製.生成的EPO具有生物活性,可明顯刺激骨髓紅繫細胞的生長.結論:在細胞水平四環素繫統可控製轉導的EPO基因的錶達,併且生成有生物活性的EPO,達到基因治療的要求.
목적:극륭、구건、감정중조인촉홍세포생성소(rhEPO)기인사배소조공진핵표체재체;탐토사배소계통대rhEPO기인표체적조공.방법:이함rhEPO전장cDNA적CHO세포위모판,통과RT-PCR방법확증출rhEPO기인,장기극륭도진핵표체재체pTRE2hyg적다극륭위점,구건성pTRE2hyyg-EPO,진행매절급측서감정.장pTRE2hyg-EPO급Tet-On질립전도입SD대서골격기세포,용RT-PCR、Western인적실험화반고체세포배양실험검측rhEPO기인재대서골격기내적표체화단백적활성,병관찰사배소계통대EPO표체적조공작용.결과:(1)성공구건료사배소조공진핵표체질립pTRE2hyg-EPO,경측서감정여소수EPO기인서렬일치.(2)rhEPO기인가이재대서골격기원대세포중표체,병수사배소조공계통적공제.생성적EPO구유생물활성,가명현자격골수홍계세포적생장.결론:재세포수평사배소계통가공제전도적EPO기인적표체,병차생성유생물활성적EPO,체도기인치료적요구.
