CAJ | 학술논문

通过RT-PCR的方法从三个月的流产绒毛组织中克隆目的基因VEGFR2 (Vascular endothelial growth factor receptor 2, 血管内皮细胞生长因子受体2) 胞外I-IV区, 连接到真核表达载体上构建了重组表达载体.首先在无血清悬浮培养的HEK293细胞中, 使用报告基因GFP(Green fluorescence protein, 绿色荧光蛋白)优化转染条件, 发现在转染时DNA: PEI=1:2 (W/W)、1.5 -g DNA/106 cells及开始转染4 h内使用无血清、摇床(120 r/min)时可以达到最佳的转染效率和细胞数量.在确定转染条件之后, 将构建的表达载体分别在HEK293细胞、COS-7细胞和CHO-K1细胞中进行瞬时转染表达, 结果发现仅在CHO-K1细胞的培养上清中检测到目的蛋白的表达.瞬时转染CHO-K1细胞至总体积约为1.5 L, 由于目的蛋白的羧基端有8-His标签, 通过Ni2+-IDA柱纯化得到5 mg左右的目的蛋白.
통과RT-PCR적방법종삼개월적유산융모조직중극륭목적기인VEGFR2 (Vascular endothelial growth factor receptor 2, 혈관내피세포생장인자수체2) 포외I-IV구, 련접도진핵표체재체상구건료중조표체재체.수선재무혈청현부배양적HEK293세포중, 사용보고기인GFP(Green fluorescence protein, 록색형광단백)우화전염조건, 발현재전염시DNA: PEI=1:2 (W/W)、1.5 -g DNA/106 cells급개시전염4 h내사용무혈청、요상(120 r/min)시가이체도최가적전염효솔화세포수량.재학정전염조건지후, 장구건적표체재체분별재HEK293세포、COS-7세포화CHO-K1세포중진행순시전염표체, 결과발현부재CHO-K1세포적배양상청중검측도목적단백적표체.순시전염CHO-K1세포지총체적약위1.5 L, 유우목적단백적최기단유8-His표첨, 통과Ni2+-IDA주순화득도5 mg좌우적목적단백.