CAJ | 학술논문

目的体外制备兔内皮祖细胞(EPC)种植支架,并评价其可行性.方法采用密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,接种于人纤维连接蛋白包被的培养板七,予含内皮细胞生长添加剂30 μg/mL的M199培养基培养.培养2周后进行免疫荧光染色和免疫细胞化学法鉴定EPC,检测其增殖、迁移、黏附和分泌血管内皮生长凶子(VEGF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和一氧化氮(NO)的能力.培养的EPC消化后,将其浇注到有人纤维连接蛋白包被和无包被的裸支架上,6 d后行扫描电镜和荧光显微镜检查,观察其表面细胞的生长情况.结果单个核细胞培养14 d后,出现大量梭形细胞,免疫荧光染色显示细胞可同时摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和结合FITC标记的凝集素者,表明为正在分化的EPC,同时证实其表达内皮细胞的特异标志vWF.培养2周后的EPC数量呈指数增加;EPC的黏附率为96.7%±3.2%;迁移为15±4细骨包/×400视野;可分泌VEGF、GCSF和NO.与无包被的裸支架组相比,有纤维连接蛋白包被的支架组,EPC黏附多(27.80±4.26细胞×400视野比6.10±3.07细胞/×400视野,P＜0.05),内皮化完全.结论 EPC可向内皮细胞方向分化,并且具有高增殖、高迁移和高黏附的能力.采用EPC在体外制备细胞种植支架是可行的,而纤维连接蛋白可加速其黏附.
목적 체외제비토내피조세포(EPC)충식지가,병평개기가행성.방법 채용밀도제도리심법분리토외주혈단개핵세포,접충우인섬유련접단백포피적배양판칠,여함내피세포생장첨가제30 μg/mL적M199배양기배양.배양2주후진행면역형광염색화면역세포화학법감정EPC,검측기증식、천이、점부화분비혈관내피생장흉자(VEGF)、립세포집락자격인자(G-CSF)화일양화담(NO)적능력.배양적EPC소화후,장기요주도유인섬유련접단백포피화무포피적라지가상,6 d후행소묘전경화형광현미경검사,관찰기표면세포적생장정황.결과 단개핵세포배양14 d후,출현대량사형세포,면역형광염색현시세포가동시섭취Dil표기적을선화저밀도지단백화결합FITC표기적응집소자,표명위정재분화적EPC,동시증실기표체내피세포적특이표지vWF.배양2주후적EPC수량정지수증가;EPC적점부솔위96.7%±3.2%;천이위15±4세골포/×400시야;가분비VEGF、GCSF화NO.여무포피적라지가조상비,유섬유련접단백포피적지가조,EPC점부다(27.80±4.26세포×400시야비6.10±3.07세포/×400시야,P＜0.05),내피화완전.결론 EPC가향내피세포방향분화,병차구유고증식、고천이화고점부적능력.채용EPC재체외제비세포충식지가시가행적,이섬유련접단백가가속기점부.