中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
5期
403-407
,共5页
狂犬病病毒:糖蛋白基因%基因修饰%原核表达
狂犬病病毒:糖蛋白基因%基因脩飾%原覈錶達
광견병병독:당단백기인%기인수식%원핵표체
目的 探讨提高狂犬病病毒(RV)HEP-Flury株糖蛋白(GP)基因在原核细胞中表达的水平和与抗体的反应水平.方法 以RV HEP-Flury株的全长质粒为模板,采用PCR方法扩增获得去除信号肽基因的GP(G1)、GP的膜外区基因(G2).选取膜外区基因中抗原表位富集区基因,对氨基酸密码子进行修饰并合成其序列(G3).分别将G1、G2及G3基因亚克隆到表达载体pET32a(+),构建融合表达质粒pET32a-G1、pET32a-G2及pET32a-G3,转化表达宿主菌BL21,并利用IPTG诱导表达.经SDS-PAGE,Western-blotting和薄层扫描分析,比较重组蛋白的表达量.结果 G3基因的表达量比G1、G2基因明显提高.结论 通过密码子优化,能显著提高G基因在原核细胞中的表达水平.
目的 探討提高狂犬病病毒(RV)HEP-Flury株糖蛋白(GP)基因在原覈細胞中錶達的水平和與抗體的反應水平.方法 以RV HEP-Flury株的全長質粒為模闆,採用PCR方法擴增穫得去除信號肽基因的GP(G1)、GP的膜外區基因(G2).選取膜外區基因中抗原錶位富集區基因,對氨基痠密碼子進行脩飾併閤成其序列(G3).分彆將G1、G2及G3基因亞剋隆到錶達載體pET32a(+),構建融閤錶達質粒pET32a-G1、pET32a-G2及pET32a-G3,轉化錶達宿主菌BL21,併利用IPTG誘導錶達.經SDS-PAGE,Western-blotting和薄層掃描分析,比較重組蛋白的錶達量.結果 G3基因的錶達量比G1、G2基因明顯提高.結論 通過密碼子優化,能顯著提高G基因在原覈細胞中的錶達水平.
목적 탐토제고광견병병독(RV)HEP-Flury주당단백(GP)기인재원핵세포중표체적수평화여항체적반응수평.방법 이RV HEP-Flury주적전장질립위모판,채용PCR방법확증획득거제신호태기인적GP(G1)、GP적막외구기인(G2).선취막외구기인중항원표위부집구기인,대안기산밀마자진행수식병합성기서렬(G3).분별장G1、G2급G3기인아극륭도표체재체pET32a(+),구건융합표체질립pET32a-G1、pET32a-G2급pET32a-G3,전화표체숙주균BL21,병이용IPTG유도표체.경SDS-PAGE,Western-blotting화박층소묘분석,비교중조단백적표체량.결과 G3기인적표체량비G1、G2기인명현제고.결론 통과밀마자우화,능현저제고G기인재원핵세포중적표체수평.
