血栓与止血学
血栓與止血學
혈전여지혈학
CHINESE JOURNAL OF THROMBOSIS AND HEMOSTASIS
2010年
6期
244-249
,共6页
心肌梗死%脐带血%间充质干细胞%移植
心肌梗死%臍帶血%間充質榦細胞%移植
심기경사%제대혈%간충질간세포%이식
目的 研究脐带血来源的问充质干细胞(mesenchymal stern cells,MSCs)体外分离、纯化及培养的条件,以建立稳定的体外培养体系,满足实验和临床的需要;探讨经尾静脉移植脐血间充质干细胞对心肌梗死大鼠心功能的影响.方法 无菌条件下采集健康育龄产妇正常分娩胎儿的脐带血42份,脐血随机分成3组:FBS(胎牛血清)未包被组、FBS包被组和mesencult培养基组.FBS未包被组和FBS包被组均使用含10%FBS的LG-DMEM培养基、mesencult培养基组使用专用来培养干细胞的mesencult培养基,与其添加物配合使用.3组均用Ficoll淋巴细胞分离液,密度梯度法分离脐血单个核细胞(MNC),将单个核细胞按密度1×108/ml接种于T25培养瓶中,置37°C饱和湿度含5%CO2孵育箱培养,72h后全量换液,去除未贴壁细胞,以后均7d换液1次.待细胞长到80%铺满瓶底时结束原代培养.按1:1进行消化传代.观察不同培养条件对脐血MSCs生长的影响.取P2代细胞用流式细胞仪检测细胞表面CD 29、CD 34、CD45、CD 105标志.将36只SD大鼠随机分成MSCs移植组、假手术组和心肌梗死植组各12只,结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌梗死模型.心肌梗死后1周,经尾静脉注射脐血MSCs,4周后测定大鼠血流动力学.结果 42份脐血中单个核细胞原代培养,其中仅8份传代培养成功,而其中mesencult条件培养基有5份培养成功,明显高于FBS包被组(3份)和FBs未包被组(0份).流式细胞仪检测第2代的脐血MSCs结果显示,P2代MSCs不表达或极弱表达CD 34,CD45造血细胞标志,稳定地高表达CD 29、CD 105间允质细胞相关的表面抗原标记.这与骨髓MSCs的表面抗原标志相一致.移植后4周,经血流动力学检测,与心梗组比较,MSCs移植组左室心功能明显改善(P＜O.05).结论 将脐血单个核细胞以高密度(1×108＞cells/ml)接种在mesencult堵养基中可以在体外成功培养出较纯化的脐血MSCs,其培养成功率较高.脐血MSCs的免疫表型符合间充质干细胞特征.脐血MSCs移植能促进心梗大鼠心功能恢复.
目的 研究臍帶血來源的問充質榦細胞(mesenchymal stern cells,MSCs)體外分離、純化及培養的條件,以建立穩定的體外培養體繫,滿足實驗和臨床的需要;探討經尾靜脈移植臍血間充質榦細胞對心肌梗死大鼠心功能的影響.方法 無菌條件下採集健康育齡產婦正常分娩胎兒的臍帶血42份,臍血隨機分成3組:FBS(胎牛血清)未包被組、FBS包被組和mesencult培養基組.FBS未包被組和FBS包被組均使用含10%FBS的LG-DMEM培養基、mesencult培養基組使用專用來培養榦細胞的mesencult培養基,與其添加物配閤使用.3組均用Ficoll淋巴細胞分離液,密度梯度法分離臍血單箇覈細胞(MNC),將單箇覈細胞按密度1×108/ml接種于T25培養瓶中,置37°C飽和濕度含5%CO2孵育箱培養,72h後全量換液,去除未貼壁細胞,以後均7d換液1次.待細胞長到80%鋪滿瓶底時結束原代培養.按1:1進行消化傳代.觀察不同培養條件對臍血MSCs生長的影響.取P2代細胞用流式細胞儀檢測細胞錶麵CD 29、CD 34、CD45、CD 105標誌.將36隻SD大鼠隨機分成MSCs移植組、假手術組和心肌梗死植組各12隻,結扎左冠狀動脈前降支製備大鼠心肌梗死模型.心肌梗死後1週,經尾靜脈註射臍血MSCs,4週後測定大鼠血流動力學.結果 42份臍血中單箇覈細胞原代培養,其中僅8份傳代培養成功,而其中mesencult條件培養基有5份培養成功,明顯高于FBS包被組(3份)和FBs未包被組(0份).流式細胞儀檢測第2代的臍血MSCs結果顯示,P2代MSCs不錶達或極弱錶達CD 34,CD45造血細胞標誌,穩定地高錶達CD 29、CD 105間允質細胞相關的錶麵抗原標記.這與骨髓MSCs的錶麵抗原標誌相一緻.移植後4週,經血流動力學檢測,與心梗組比較,MSCs移植組左室心功能明顯改善(P＜O.05).結論 將臍血單箇覈細胞以高密度(1×108＞cells/ml)接種在mesencult堵養基中可以在體外成功培養齣較純化的臍血MSCs,其培養成功率較高.臍血MSCs的免疫錶型符閤間充質榦細胞特徵.臍血MSCs移植能促進心梗大鼠心功能恢複.
목적 연구제대혈래원적문충질간세포(mesenchymal stern cells,MSCs)체외분리、순화급배양적조건,이건립은정적체외배양체계,만족실험화림상적수요;탐토경미정맥이식제혈간충질간세포대심기경사대서심공능적영향.방법 무균조건하채집건강육령산부정상분면태인적제대혈42빈,제혈수궤분성3조:FBS(태우혈청)미포피조、FBS포피조화mesencult배양기조.FBS미포피조화FBS포피조균사용함10%FBS적LG-DMEM배양기、mesencult배양기조사용전용래배양간세포적mesencult배양기,여기첨가물배합사용.3조균용Ficoll림파세포분리액,밀도제도법분리제혈단개핵세포(MNC),장단개핵세포안밀도1×108/ml접충우T25배양병중,치37°C포화습도함5%CO2부육상배양,72h후전량환액,거제미첩벽세포,이후균7d환액1차.대세포장도80%포만병저시결속원대배양.안1:1진행소화전대.관찰불동배양조건대제혈MSCs생장적영향.취P2대세포용류식세포의검측세포표면CD 29、CD 34、CD45、CD 105표지.장36지SD대서수궤분성MSCs이식조、가수술조화심기경사식조각12지,결찰좌관상동맥전강지제비대서심기경사모형.심기경사후1주,경미정맥주사제혈MSCs,4주후측정대서혈류동역학.결과 42빈제혈중단개핵세포원대배양,기중부8빈전대배양성공,이기중mesencult조건배양기유5빈배양성공,명현고우FBS포피조(3빈)화FBs미포피조(0빈).류식세포의검측제2대적제혈MSCs결과현시,P2대MSCs불표체혹겁약표체CD 34,CD45조혈세포표지,은정지고표체CD 29、CD 105간윤질세포상관적표면항원표기.저여골수MSCs적표면항원표지상일치.이식후4주,경혈류동역학검측,여심경조비교,MSCs이식조좌실심공능명현개선(P＜O.05).결론 장제혈단개핵세포이고밀도(1×108＞cells/ml)접충재mesencult도양기중가이재체외성공배양출교순화적제혈MSCs,기배양성공솔교고.제혈MSCs적면역표형부합간충질간세포특정.제혈MSCs이식능촉진심경대서심공능회복.
