作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2011年
1期
79-86
,共8页
王明霞%高翔%陈其皎%董剑%赵万春%李艳亮%李敏
王明霞%高翔%陳其皎%董劍%趙萬春%李豔亮%李敏
왕명하%고상%진기교%동검%조만춘%리염량%리민
普通小麦%γ-醇溶蛋白%原核表达%粉质参数
普通小麥%γ-醇溶蛋白%原覈錶達%粉質參數
보통소맥%γ-순용단백%원핵표체%분질삼수
利用设计合成的特异γ-醇溶蛋白基因引物,采用PCR方法从小麦品种陕253克隆获得一个γ-醇溶蛋白基因(GenBank登录号为GQ857626).序列分析表明,该基因编码产物的Ⅱ区由于碱基转换产生一个额外的半胱氨酸残基.构建了GQ857626的原核表达载体并转入表达菌株E.coli Rosetta gami B(DE3),IPTG诱导其成功表达.使用HisTrap HP组氨酸标记亲和层析柱纯化该基因的表达产物,并使用4 g粉质仪分析其功能.结果显示,将此纯化蛋白通过氧化还原反应整合到基础面粉后,面团的形成时间缩短,稳定时间减少,弱化度增加,导致主要的粉质指数明显下降,说明该亚基对面团流变学性质整体表现不利.
利用設計閤成的特異γ-醇溶蛋白基因引物,採用PCR方法從小麥品種陝253剋隆穫得一箇γ-醇溶蛋白基因(GenBank登錄號為GQ857626).序列分析錶明,該基因編碼產物的Ⅱ區由于堿基轉換產生一箇額外的半胱氨痠殘基.構建瞭GQ857626的原覈錶達載體併轉入錶達菌株E.coli Rosetta gami B(DE3),IPTG誘導其成功錶達.使用HisTrap HP組氨痠標記親和層析柱純化該基因的錶達產物,併使用4 g粉質儀分析其功能.結果顯示,將此純化蛋白通過氧化還原反應整閤到基礎麵粉後,麵糰的形成時間縮短,穩定時間減少,弱化度增加,導緻主要的粉質指數明顯下降,說明該亞基對麵糰流變學性質整體錶現不利.
이용설계합성적특이γ-순용단백기인인물,채용PCR방법종소맥품충협253극륭획득일개γ-순용단백기인(GenBank등록호위GQ857626).서렬분석표명,해기인편마산물적Ⅱ구유우감기전환산생일개액외적반광안산잔기.구건료GQ857626적원핵표체재체병전입표체균주E.coli Rosetta gami B(DE3),IPTG유도기성공표체.사용HisTrap HP조안산표기친화층석주순화해기인적표체산물,병사용4 g분질의분석기공능.결과현시,장차순화단백통과양화환원반응정합도기출면분후,면단적형성시간축단,은정시간감소,약화도증가,도치주요적분질지수명현하강,설명해아기대면단류변학성질정체표현불리.
