生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2011年
4期
29-33
,共5页
王圣钧%郁慧丽%翟琳%王倚%梁泉峰%祁庆生
王聖鈞%鬱慧麗%翟琳%王倚%樑泉峰%祁慶生
왕골균%욱혜려%적림%왕의%량천봉%기경생
胰高血糖素样肽-1%Fc融合蛋白%巴斯德毕赤酵母菌%高效表达
胰高血糖素樣肽-1%Fc融閤蛋白%巴斯德畢赤酵母菌%高效錶達
이고혈당소양태-1%Fc융합단백%파사덕필적효모균%고효표체
目的:构建GLP-1-IgG Fc融合蛋白分子并在毕赤酵母中实现高效表达.方法:使用蛋白质工程技术改造GLP -1,去除其蛋白酶降解位点,然后利用重叠延伸PCR方法得到改造后的GLP -1与人IgG-Fc片断的嵌合体基因并将其插入pPIC9K载体中.以重组载体转化巴斯德毕赤酵母菌中进行表达.采用SDS-PAGE和Western Blot方法检测重组蛋白的表达.结果:成功的构建了GLP -1-IgG Fc嵌合体基因并使其在重组毕赤酵母中高效分泌表达.在25℃条件下,摇瓶培养添加0.5％甲醇诱导72h后融合蛋白的表达量最大,为5mg/L.SDS-PAGE和Westem-Blot结果表明表达产物为GLP -1-IgG Fc融合蛋白.结论:获得了高效表达GLP -1-IgG Fc融合蛋白的毕赤酵母菌株,为GLP -1-IgG Fc的活性和半衰期测定及下一步的开发奠定了基础,并为在毕赤酵母菌中表达其他Fc融合蛋白和抗体提供了参考.
目的:構建GLP-1-IgG Fc融閤蛋白分子併在畢赤酵母中實現高效錶達.方法:使用蛋白質工程技術改造GLP -1,去除其蛋白酶降解位點,然後利用重疊延伸PCR方法得到改造後的GLP -1與人IgG-Fc片斷的嵌閤體基因併將其插入pPIC9K載體中.以重組載體轉化巴斯德畢赤酵母菌中進行錶達.採用SDS-PAGE和Western Blot方法檢測重組蛋白的錶達.結果:成功的構建瞭GLP -1-IgG Fc嵌閤體基因併使其在重組畢赤酵母中高效分泌錶達.在25℃條件下,搖瓶培養添加0.5％甲醇誘導72h後融閤蛋白的錶達量最大,為5mg/L.SDS-PAGE和Westem-Blot結果錶明錶達產物為GLP -1-IgG Fc融閤蛋白.結論:穫得瞭高效錶達GLP -1-IgG Fc融閤蛋白的畢赤酵母菌株,為GLP -1-IgG Fc的活性和半衰期測定及下一步的開髮奠定瞭基礎,併為在畢赤酵母菌中錶達其他Fc融閤蛋白和抗體提供瞭參攷.
목적:구건GLP-1-IgG Fc융합단백분자병재필적효모중실현고효표체.방법:사용단백질공정기술개조GLP -1,거제기단백매강해위점,연후이용중첩연신PCR방법득도개조후적GLP -1여인IgG-Fc편단적감합체기인병장기삽입pPIC9K재체중.이중조재체전화파사덕필적효모균중진행표체.채용SDS-PAGE화Western Blot방법검측중조단백적표체.결과:성공적구건료GLP -1-IgG Fc감합체기인병사기재중조필적효모중고효분비표체.재25℃조건하,요병배양첨가0.5％갑순유도72h후융합단백적표체량최대,위5mg/L.SDS-PAGE화Westem-Blot결과표명표체산물위GLP -1-IgG Fc융합단백.결론:획득료고효표체GLP -1-IgG Fc융합단백적필적효모균주,위GLP -1-IgG Fc적활성화반쇠기측정급하일보적개발전정료기출,병위재필적효모균중표체기타Fc융합단백화항체제공료삼고.
