中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2012年
3期
679-685
,共7页
张娜%张丽艳%张燕%纪庆%王金宏%祁瑞哲%许静%袁卫平%程涛%高瀛岱
張娜%張麗豔%張燕%紀慶%王金宏%祁瑞哲%許靜%袁衛平%程濤%高瀛岱
장나%장려염%장연%기경%왕금굉%기서철%허정%원위평%정도%고영대
Notch信号通路%造血干细胞%DAPT
Notch信號通路%造血榦細胞%DAPT
Notch신호통로%조혈간세포%DAPT
本研究探讨DAPT(N-[ N-(3,5-difluorophenacetyl-L:-alanyl)]-S-phenylglycinet-butyl ester)对小鼠骨髓造血干细胞( HSC)细胞周期、凋亡、分化及扩增的影响及其可能的相关机制.运用实时定量PCR检测DAPT1 μmol/L作用前后细胞周期相关基因p18、p21、p37、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA表达水平及凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xl、mcl-1、Bax、Bim、p53、Puma mR NA表达量的水平；用流式细胞术检测DAPT作用前后小鼠骨髓细胞Lin - c-kit+ Sca-1+及CD34 - Lin - c-kit+ Sca-1+表型细胞的细胞周期及凋亡的变化；用单细胞培养检测DAPT作用前后单个HSC分化的变化；用长周期培养实验检测DAPT作用前后HSC扩增能力的变化.结果显示,Lin- c-kit+Sca-1+表型细胞经DAPT处理5d后,小鼠骨髓细胞中细胞周期相关基因CDK1、CDK2、CDK4、CDK6及27的mRNA表达量较对照组明显升高(P＜0.01 - P＜0.001),p18和p21表达量明显降低(P＜0.01 -P ＜0.001)；凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xl、Bax、p53、Puma表达量较对照组明显升高(P ＜0.01 -P ＜0.001),Bim表达量明显降低(P＜0.001),Mcl-1的表达量无差异.加DAPT处理5d后,小鼠骨髓细胞Lin- c-kit+ Sca-1+表型细胞的细胞周期的变化无统计学意义(P＞0.05),小鼠骨髓细胞CD34 - Lin- c-kit+ Sca-1+表型细胞的G0期的细胞减少,G1期的细胞明显增多(P＜0.05),处于S、G2、M期的细胞数量的变化无统计学意义(P＞0.05)；小鼠骨髓细胞Lin - c-kit+Sca-1+表型细胞和CD34 - Lin - c-kit+ Sca-1+表型细胞的细胞凋亡增多(P＜0.05).单细胞培养10 d实验显示,每板形成的克隆数、每孔平均细胞数的变化及DAPT对单个造血干细胞分化影响的差异均无统计学意义(P＞0.05).DAPT处理3d后,小鼠骨髓细胞中HSC的扩增能力下降.结论:DAPT可加速小鼠骨髓细胞CD34 - Lin - c-kit+Sca-1+表型细胞的耗竭,促进小鼠骨髓细胞Lin - c-kit+ Sca-1+及CD34 Lin c-kit+ Sca-1+表型细胞的凋亡,降低小鼠骨髓细胞中HSC的扩增能力,但对单个CD34 Lin c-kit+Sca-1+表型细胞的增殖及分化无明显影响.
本研究探討DAPT(N-[ N-(3,5-difluorophenacetyl-L:-alanyl)]-S-phenylglycinet-butyl ester)對小鼠骨髓造血榦細胞( HSC)細胞週期、凋亡、分化及擴增的影響及其可能的相關機製.運用實時定量PCR檢測DAPT1 μmol/L作用前後細胞週期相關基因p18、p21、p37、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA錶達水平及凋亡相關基因Bcl-2、Bcl-xl、mcl-1、Bax、Bim、p53、Puma mR NA錶達量的水平；用流式細胞術檢測DAPT作用前後小鼠骨髓細胞Lin - c-kit+ Sca-1+及CD34 - Lin - c-kit+ Sca-1+錶型細胞的細胞週期及凋亡的變化；用單細胞培養檢測DAPT作用前後單箇HSC分化的變化；用長週期培養實驗檢測DAPT作用前後HSC擴增能力的變化.結果顯示,Lin- c-kit+Sca-1+錶型細胞經DAPT處理5d後,小鼠骨髓細胞中細胞週期相關基因CDK1、CDK2、CDK4、CDK6及27的mRNA錶達量較對照組明顯升高(P＜0.01 - P＜0.001),p18和p21錶達量明顯降低(P＜0.01 -P ＜0.001)；凋亡相關基因Bcl-2、Bcl-xl、Bax、p53、Puma錶達量較對照組明顯升高(P ＜0.01 -P ＜0.001),Bim錶達量明顯降低(P＜0.001),Mcl-1的錶達量無差異.加DAPT處理5d後,小鼠骨髓細胞Lin- c-kit+ Sca-1+錶型細胞的細胞週期的變化無統計學意義(P＞0.05),小鼠骨髓細胞CD34 - Lin- c-kit+ Sca-1+錶型細胞的G0期的細胞減少,G1期的細胞明顯增多(P＜0.05),處于S、G2、M期的細胞數量的變化無統計學意義(P＞0.05)；小鼠骨髓細胞Lin - c-kit+Sca-1+錶型細胞和CD34 - Lin - c-kit+ Sca-1+錶型細胞的細胞凋亡增多(P＜0.05).單細胞培養10 d實驗顯示,每闆形成的剋隆數、每孔平均細胞數的變化及DAPT對單箇造血榦細胞分化影響的差異均無統計學意義(P＞0.05).DAPT處理3d後,小鼠骨髓細胞中HSC的擴增能力下降.結論:DAPT可加速小鼠骨髓細胞CD34 - Lin - c-kit+Sca-1+錶型細胞的耗竭,促進小鼠骨髓細胞Lin - c-kit+ Sca-1+及CD34 Lin c-kit+ Sca-1+錶型細胞的凋亡,降低小鼠骨髓細胞中HSC的擴增能力,但對單箇CD34 Lin c-kit+Sca-1+錶型細胞的增殖及分化無明顯影響.
본연구탐토DAPT(N-[ N-(3,5-difluorophenacetyl-L:-alanyl)]-S-phenylglycinet-butyl ester)대소서골수조혈간세포( HSC)세포주기、조망、분화급확증적영향급기가능적상관궤제.운용실시정량PCR검측DAPT1 μmol/L작용전후세포주기상관기인p18、p21、p37、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA표체수평급조망상관기인Bcl-2、Bcl-xl、mcl-1、Bax、Bim、p53、Puma mR NA표체량적수평；용류식세포술검측DAPT작용전후소서골수세포Lin - c-kit+ Sca-1+급CD34 - Lin - c-kit+ Sca-1+표형세포적세포주기급조망적변화；용단세포배양검측DAPT작용전후단개HSC분화적변화；용장주기배양실험검측DAPT작용전후HSC확증능력적변화.결과현시,Lin- c-kit+Sca-1+표형세포경DAPT처리5d후,소서골수세포중세포주기상관기인CDK1、CDK2、CDK4、CDK6급27적mRNA표체량교대조조명현승고(P＜0.01 - P＜0.001),p18화p21표체량명현강저(P＜0.01 -P ＜0.001)；조망상관기인Bcl-2、Bcl-xl、Bax、p53、Puma표체량교대조조명현승고(P ＜0.01 -P ＜0.001),Bim표체량명현강저(P＜0.001),Mcl-1적표체량무차이.가DAPT처리5d후,소서골수세포Lin- c-kit+ Sca-1+표형세포적세포주기적변화무통계학의의(P＞0.05),소서골수세포CD34 - Lin- c-kit+ Sca-1+표형세포적G0기적세포감소,G1기적세포명현증다(P＜0.05),처우S、G2、M기적세포수량적변화무통계학의의(P＞0.05)；소서골수세포Lin - c-kit+Sca-1+표형세포화CD34 - Lin - c-kit+ Sca-1+표형세포적세포조망증다(P＜0.05).단세포배양10 d실험현시,매판형성적극륭수、매공평균세포수적변화급DAPT대단개조혈간세포분화영향적차이균무통계학의의(P＞0.05).DAPT처리3d후,소서골수세포중HSC적확증능력하강.결론:DAPT가가속소서골수세포CD34 - Lin - c-kit+Sca-1+표형세포적모갈,촉진소서골수세포Lin - c-kit+ Sca-1+급CD34 Lin c-kit+ Sca-1+표형세포적조망,강저소서골수세포중HSC적확증능력,단대단개CD34 Lin c-kit+Sca-1+표형세포적증식급분화무명현영향.
