中国实用内科杂志
中國實用內科雜誌
중국실용내과잡지
CHINESE JOURNAL OF PRACTICAL INTERNAL MEDICINE
2007年
10期
758-761
,共4页
黏蛋白类%黏蛋白5AC%中性粒细胞弹力酶%Sp-1元件
黏蛋白類%黏蛋白5AC%中性粒細胞彈力酶%Sp-1元件
점단백류%점단백5AC%중성립세포탄력매%Sp-1원건
目的 探讨中性粒细胞弹力酶(neutrophil elastase,NE)诱导气道黏液上皮细胞呼吸道黏蛋白(MUC)5AC产生和mRNA表达以及MUC5AC基因顺式调控元件特殊蛋白-1(specificity protein,Sp-1)在该基因转录调控中的作用.方法 2006年3月至9月,在重庆医科大学病毒性肝炎研究所采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测培养细胞经0,10,50,100 nmol/L NE刺激诱导5,10,30 min后上清液MUC5AC质量浓度和细胞中MUC5AC mRNA表达水平.应用定点突变技术,在重组质粒的基础上建立MUC5AC启动子区Sp-1结合位点和核转录因子(NF)-kB结合位点单独突变体,并测定NE刺激的转染细胞荧光素酶相对活性.结果 (1)10,50,100 nmol/L NE处理A549细胞30 min,相同时间点不同浓度NE组MUC5AC蛋白表达水平分别与对照组比较差异均有显著性意义(t=3.406～20.909,均P＜0.05),且呈剂量依赖的趋势(P＜0.01).(2)100 nmol/L NE处理30 min后A549细胞MUC5AC mRNA相对表达量明显高于对照组(t=10.299,P＜0.01).(3)NE可诱导含有启动子序列-324 bp的重组质粒荧光素酶相对光强度(1.430±0.042)及pGL3E-MUC5ACNF-κB-MU荧光素酶相对光强度(1.570±0.071)增加,与未经NE诱导的未突变对照组相对光强度(0.799±0.051)相比差异具有显著性意义(t=25.675,t=11.110,P均＜0.01),而NE不能诱导pGL3E-MUC5AC-Sp-1-MU荧光素酶表达增加(P＞0.05).结论 NE可诱导A549细胞MUC5AC产生及其mRNA表达;MUC5AC基因启动子顺式作用元件下游Sp-1位点在NE诱导MUC5AC基因表达机制中起重要作用.
目的 探討中性粒細胞彈力酶(neutrophil elastase,NE)誘導氣道黏液上皮細胞呼吸道黏蛋白(MUC)5AC產生和mRNA錶達以及MUC5AC基因順式調控元件特殊蛋白-1(specificity protein,Sp-1)在該基因轉錄調控中的作用.方法 2006年3月至9月,在重慶醫科大學病毒性肝炎研究所採用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和反轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法分彆檢測培養細胞經0,10,50,100 nmol/L NE刺激誘導5,10,30 min後上清液MUC5AC質量濃度和細胞中MUC5AC mRNA錶達水平.應用定點突變技術,在重組質粒的基礎上建立MUC5AC啟動子區Sp-1結閤位點和覈轉錄因子(NF)-kB結閤位點單獨突變體,併測定NE刺激的轉染細胞熒光素酶相對活性.結果 (1)10,50,100 nmol/L NE處理A549細胞30 min,相同時間點不同濃度NE組MUC5AC蛋白錶達水平分彆與對照組比較差異均有顯著性意義(t=3.406～20.909,均P＜0.05),且呈劑量依賴的趨勢(P＜0.01).(2)100 nmol/L NE處理30 min後A549細胞MUC5AC mRNA相對錶達量明顯高于對照組(t=10.299,P＜0.01).(3)NE可誘導含有啟動子序列-324 bp的重組質粒熒光素酶相對光彊度(1.430±0.042)及pGL3E-MUC5ACNF-κB-MU熒光素酶相對光彊度(1.570±0.071)增加,與未經NE誘導的未突變對照組相對光彊度(0.799±0.051)相比差異具有顯著性意義(t=25.675,t=11.110,P均＜0.01),而NE不能誘導pGL3E-MUC5AC-Sp-1-MU熒光素酶錶達增加(P＞0.05).結論 NE可誘導A549細胞MUC5AC產生及其mRNA錶達;MUC5AC基因啟動子順式作用元件下遊Sp-1位點在NE誘導MUC5AC基因錶達機製中起重要作用.
목적 탐토중성립세포탄력매(neutrophil elastase,NE)유도기도점액상피세포호흡도점단백(MUC)5AC산생화mRNA표체이급MUC5AC기인순식조공원건특수단백-1(specificity protein,Sp-1)재해기인전록조공중적작용.방법 2006년3월지9월,재중경의과대학병독성간염연구소채용매련면역흡부시험(ELISA)화반전록취합매련반응(RT-PCR)방법분별검측배양세포경0,10,50,100 nmol/L NE자격유도5,10,30 min후상청액MUC5AC질량농도화세포중MUC5AC mRNA표체수평.응용정점돌변기술,재중조질립적기출상건립MUC5AC계동자구Sp-1결합위점화핵전록인자(NF)-kB결합위점단독돌변체,병측정NE자격적전염세포형광소매상대활성.결과 (1)10,50,100 nmol/L NE처리A549세포30 min,상동시간점불동농도NE조MUC5AC단백표체수평분별여대조조비교차이균유현저성의의(t=3.406～20.909,균P＜0.05),차정제량의뢰적추세(P＜0.01).(2)100 nmol/L NE처리30 min후A549세포MUC5AC mRNA상대표체량명현고우대조조(t=10.299,P＜0.01).(3)NE가유도함유계동자서렬-324 bp적중조질립형광소매상대광강도(1.430±0.042)급pGL3E-MUC5ACNF-κB-MU형광소매상대광강도(1.570±0.071)증가,여미경NE유도적미돌변대조조상대광강도(0.799±0.051)상비차이구유현저성의의(t=25.675,t=11.110,P균＜0.01),이NE불능유도pGL3E-MUC5AC-Sp-1-MU형광소매표체증가(P＞0.05).결론 NE가유도A549세포MUC5AC산생급기mRNA표체;MUC5AC기인계동자순식작용원건하유Sp-1위점재NE유도MUC5AC기인표체궤제중기중요작용.
