CAJ | 학술논문

本研究分离人胚主动脉-性腺-中肾(AGM)区遣血干/祖细胞(HSPC)并在含人AGM区基质细胞的培养体系中进行培养,以了解人AGM区基质细胞对HSPC的作用.以免疫组织化学方法检测人胎龄28-45天胚胎AGM区细胞CD34、Flk-1、VEGF的表达;分离AGM来源的HSPC,通过直接接种和经Transwell非直接接触两种方法接种于含人AGM区基质细胞系(hAGMS3和hAGMS4)饲养层的培养体系,观察HSPC生长情况和卵石区形成细胞(cobblestone area-forming cells,CAFC)并计数卵石区(cobblastone area,CA);用间接免疫荧光方法检测培养体系中悬浮细胞和CAFC的CD34、Flk-1表达;收获细胞进行半固体造血集落培养以检测两种培养方法对AGM-HSPC的集落形成能力影响.结果表明:人AGM区造血细胞表达CD34和Flk-1.两种接种方法均显示有CFC形成.直接接触培养能形成CD34和Flk-1双阳性的CAFC,集落总数明显高于非接触培养(hAGMS3体系:1 647±194 vs 389±31,P＜0.05;hAGMS4体系:1 586±75 vs 432±35,P＜0.05).结论:1人胚AGM区含有CD34+Flk-1+的HSC.2首次建立含人胚AGM基质细胞的AGM-HSPC培养体系,直接接触培养和非直接接触培养均能促进AGM-HSC的生长,AGM基质细胞与HSC直接接触发挥重要作用.
본연구분리인배주동맥-성선-중신(AGM)구견혈간/조세포(HSPC)병재함인AGM구기질세포적배양체계중진행배양,이료해인AGM구기질세포대HSPC적작용.이면역조직화학방법검측인태령28-45천배태AGM구세포CD34、Flk-1、VEGF적표체;분리AGM래원적HSPC,통과직접접충화경Transwell비직접접촉량충방법접충우함인AGM구기질세포계(hAGMS3화hAGMS4)사양층적배양체계,관찰HSPC생장정황화란석구형성세포(cobblestone area-forming cells,CAFC)병계수란석구(cobblastone area,CA);용간접면역형광방법검측배양체계중현부세포화CAFC적CD34、Flk-1표체;수획세포진행반고체조혈집락배양이검측량충배양방법대AGM-HSPC적집락형성능력영향.결과표명:인AGM구조혈세포표체CD34화Flk-1.량충접충방법균현시유CFC형성.직접접촉배양능형성CD34화Flk-1쌍양성적CAFC,집락총수명현고우비접촉배양(hAGMS3체계:1 647±194 vs 389±31,P＜0.05;hAGMS4체계:1 586±75 vs 432±35,P＜0.05).결론:1인배AGM구함유CD34+Flk-1+적HSC.2수차건립함인배AGM기질세포적AGM-HSPC배양체계,직접접촉배양화비직접접촉배양균능촉진AGM-HSC적생장,AGM기질세포여HSC직접접촉발휘중요작용.