安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2009年
4期
430-433
,共4页
高维陆%尹宗生%张胜权%张辉
高維陸%尹宗生%張勝權%張輝
고유륙%윤종생%장성권%장휘
大鼠%基因表达%遗传载体
大鼠%基因錶達%遺傳載體
대서%기인표체%유전재체
目的 克隆大鼠海马中Neurogenesin-1(Ng1)基因片段,构建pSecTag2/Hygro B-Ng1真核表达载体,并检测其在cos-7细胞中的表达,为进一步研究该基因对脊髓神经干细胞分化的影响提供实验依据.方法 在无RNA酶污染的条件下提取出大鼠海马总RNA.利用逆转录聚合酶链反应扩增出Ng1基因片段.将该基因片段连接到真核表达载体pSecTag2/Hygro B,聚合酶链反应初步筛选,双酶切鉴定后送测序.将构建成功的重组真核表达载体转染入cos-7细胞,Western blot鉴定重组Ng1蛋白的表达. 结果 逆转录聚合酶链反应成功获得大鼠Ng1 cDNA.随机挑选10个重组真核表达载体的克隆,聚合酶链反应筛选出阳性克隆2个,经双酶切鉴定、测序及Blast分析鉴定重组质粒构建成功.脂质体介导转染cos-7细胞48 h后,Western blot鉴定重组Ng1蛋白在cos-7细胞中的表达,在46 ku处出现阳性条带. 结论 大鼠海马Ng1基因的真核表达载体pSecTag2/Hygro B-Ng1构建成功,转染cos-7细胞后能够表达重组Ng1蛋白.
目的 剋隆大鼠海馬中Neurogenesin-1(Ng1)基因片段,構建pSecTag2/Hygro B-Ng1真覈錶達載體,併檢測其在cos-7細胞中的錶達,為進一步研究該基因對脊髓神經榦細胞分化的影響提供實驗依據.方法 在無RNA酶汙染的條件下提取齣大鼠海馬總RNA.利用逆轉錄聚閤酶鏈反應擴增齣Ng1基因片段.將該基因片段連接到真覈錶達載體pSecTag2/Hygro B,聚閤酶鏈反應初步篩選,雙酶切鑒定後送測序.將構建成功的重組真覈錶達載體轉染入cos-7細胞,Western blot鑒定重組Ng1蛋白的錶達. 結果 逆轉錄聚閤酶鏈反應成功穫得大鼠Ng1 cDNA.隨機挑選10箇重組真覈錶達載體的剋隆,聚閤酶鏈反應篩選齣暘性剋隆2箇,經雙酶切鑒定、測序及Blast分析鑒定重組質粒構建成功.脂質體介導轉染cos-7細胞48 h後,Western blot鑒定重組Ng1蛋白在cos-7細胞中的錶達,在46 ku處齣現暘性條帶. 結論 大鼠海馬Ng1基因的真覈錶達載體pSecTag2/Hygro B-Ng1構建成功,轉染cos-7細胞後能夠錶達重組Ng1蛋白.
목적 극륭대서해마중Neurogenesin-1(Ng1)기인편단,구건pSecTag2/Hygro B-Ng1진핵표체재체,병검측기재cos-7세포중적표체,위진일보연구해기인대척수신경간세포분화적영향제공실험의거.방법 재무RNA매오염적조건하제취출대서해마총RNA.이용역전록취합매련반응확증출Ng1기인편단.장해기인편단련접도진핵표체재체pSecTag2/Hygro B,취합매련반응초보사선,쌍매절감정후송측서.장구건성공적중조진핵표체재체전염입cos-7세포,Western blot감정중조Ng1단백적표체. 결과 역전록취합매련반응성공획득대서Ng1 cDNA.수궤도선10개중조진핵표체재체적극륭,취합매련반응사선출양성극륭2개,경쌍매절감정、측서급Blast분석감정중조질립구건성공.지질체개도전염cos-7세포48 h후,Western blot감정중조Ng1단백재cos-7세포중적표체,재46 ku처출현양성조대. 결론 대서해마Ng1기인적진핵표체재체pSecTag2/Hygro B-Ng1구건성공,전염cos-7세포후능구표체중조Ng1단백.
