现代食品科技
現代食品科技
현대식품과기
MODERN FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011年
4期
384-389
,共6页
王昌博%黄东彦%胡文锋%罗文华%李雪玲%颜少帆%陈永泉
王昌博%黃東彥%鬍文鋒%囉文華%李雪玲%顏少帆%陳永泉
왕창박%황동언%호문봉%라문화%리설령%안소범%진영천
甜味蛋白%马槟榔%MabinlinⅡ%大肠杆菌%诱导表达
甜味蛋白%馬檳榔%MabinlinⅡ%大腸桿菌%誘導錶達
첨미단백%마빈랑%MabinlinⅡ%대장간균%유도표체
本研究从马槟榔种子中扩增得到天然植物甜蛋白MabinlinⅡ的全长cDNA序列(M1),并通过特异引物PCR去除部分5'端序列得到修饰型的基因序列(M2).将M1与M2分别克隆至表达载体pET43.1a(+),并分别转化表达宿主菌Escherichia coli BL21(DE3)和Rosetta(DE3),成功构建出BL21(DE3)/pET43.1a-M1(缩写B-M1)、BL21(DE3)/pET43.1a-M2 (缩写B-M2)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M1(缩写R-M1)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M2(缩写R-M2)四个表达系统.经IPTG诱导表达后证明,R-M1的重组甜蛋白表达量最高,并可检测到轻微甜味和后甜感.同时利用镍柱对R-M1诱导表达的目的蛋白进行纯化,得到单一条带的重组甜蛋白.
本研究從馬檳榔種子中擴增得到天然植物甜蛋白MabinlinⅡ的全長cDNA序列(M1),併通過特異引物PCR去除部分5'耑序列得到脩飾型的基因序列(M2).將M1與M2分彆剋隆至錶達載體pET43.1a(+),併分彆轉化錶達宿主菌Escherichia coli BL21(DE3)和Rosetta(DE3),成功構建齣BL21(DE3)/pET43.1a-M1(縮寫B-M1)、BL21(DE3)/pET43.1a-M2 (縮寫B-M2)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M1(縮寫R-M1)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M2(縮寫R-M2)四箇錶達繫統.經IPTG誘導錶達後證明,R-M1的重組甜蛋白錶達量最高,併可檢測到輕微甜味和後甜感.同時利用鎳柱對R-M1誘導錶達的目的蛋白進行純化,得到單一條帶的重組甜蛋白.
본연구종마빈랑충자중확증득도천연식물첨단백MabinlinⅡ적전장cDNA서렬(M1),병통과특이인물PCR거제부분5'단서렬득도수식형적기인서렬(M2).장M1여M2분별극륭지표체재체pET43.1a(+),병분별전화표체숙주균Escherichia coli BL21(DE3)화Rosetta(DE3),성공구건출BL21(DE3)/pET43.1a-M1(축사B-M1)、BL21(DE3)/pET43.1a-M2 (축사B-M2)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M1(축사R-M1)、Rosetta(DE3)/pET43.1a-M2(축사R-M2)사개표체계통.경IPTG유도표체후증명,R-M1적중조첨단백표체량최고,병가검측도경미첨미화후첨감.동시이용얼주대R-M1유도표체적목적단백진행순화,득도단일조대적중조첨단백.
