脊柱外科杂志
脊柱外科雜誌
척주외과잡지
JOURNAL OF SPINE SURGERY
2011年
6期
360-363
,共4页
魏梅洋%董艳%庄颜峰%王万明
魏梅洋%董豔%莊顏峰%王萬明
위매양%동염%장안봉%왕만명
脂质体%绿色荧光蛋白质类%神经调节蛋白I%脊髓%基因疗法%大鼠
脂質體%綠色熒光蛋白質類%神經調節蛋白I%脊髓%基因療法%大鼠
지질체%록색형광단백질류%신경조절단백I%척수%기인요법%대서
目的 研究脂质体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和胶质细胞生长因子2(glial growth factor 2,GGF2)的双基因真核表达载体在脊髓内转染及其表达变化.方法 构建GGF2与EGFP双基因真核表达载体pIRES2-EGFP-GGF2.采用注射法将阳离子脂质体和pIRES2-EGFP-GGF2质粒混合后转染至大鼠胸段脊髓组织中.采用RT-PCR法检测不同时间点转染区域脊髓组织中GGF2 mRNA的表达.在荧光显微镜下观察不同时间点EGFP在大鼠脊髓中的表达.结果 基因转染后2d即可观察到EGFP的表达及GGF2 mRNA表达的增加,在基因转染后1～2周内EGFP及GGF2 mRNA呈高水平表达,基因转染4周后,EGFP及GGF2 mRNA的表达明显减少.结论 脂质体介导pIRES2-EGFP-GGF2转染大鼠脊髓后其表达的特点有助于基因治疗效果的即刻性,即早期大量表达,起到基因治疗的作用,又可避免外源基因的持续表达.
目的 研究脂質體介導增彊型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和膠質細胞生長因子2(glial growth factor 2,GGF2)的雙基因真覈錶達載體在脊髓內轉染及其錶達變化.方法 構建GGF2與EGFP雙基因真覈錶達載體pIRES2-EGFP-GGF2.採用註射法將暘離子脂質體和pIRES2-EGFP-GGF2質粒混閤後轉染至大鼠胸段脊髓組織中.採用RT-PCR法檢測不同時間點轉染區域脊髓組織中GGF2 mRNA的錶達.在熒光顯微鏡下觀察不同時間點EGFP在大鼠脊髓中的錶達.結果 基因轉染後2d即可觀察到EGFP的錶達及GGF2 mRNA錶達的增加,在基因轉染後1～2週內EGFP及GGF2 mRNA呈高水平錶達,基因轉染4週後,EGFP及GGF2 mRNA的錶達明顯減少.結論 脂質體介導pIRES2-EGFP-GGF2轉染大鼠脊髓後其錶達的特點有助于基因治療效果的即刻性,即早期大量錶達,起到基因治療的作用,又可避免外源基因的持續錶達.
목적 연구지질체개도증강형록색형광단백(enhanced green fluorescent protein,EGFP)화효질세포생장인자2(glial growth factor 2,GGF2)적쌍기인진핵표체재체재척수내전염급기표체변화.방법 구건GGF2여EGFP쌍기인진핵표체재체pIRES2-EGFP-GGF2.채용주사법장양리자지질체화pIRES2-EGFP-GGF2질립혼합후전염지대서흉단척수조직중.채용RT-PCR법검측불동시간점전염구역척수조직중GGF2 mRNA적표체.재형광현미경하관찰불동시간점EGFP재대서척수중적표체.결과 기인전염후2d즉가관찰도EGFP적표체급GGF2 mRNA표체적증가,재기인전염후1～2주내EGFP급GGF2 mRNA정고수평표체,기인전염4주후,EGFP급GGF2 mRNA적표체명현감소.결론 지질체개도pIRES2-EGFP-GGF2전염대서척수후기표체적특점유조우기인치료효과적즉각성,즉조기대량표체,기도기인치료적작용,우가피면외원기인적지속표체.
