中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2006年
7期
614-618
,共5页
阮萍%林晓骥%李晶%周晓辉%严杰
阮萍%林曉驥%李晶%週曉輝%嚴傑
원평%림효기%리정%주효휘%엄걸
甲型副伤寒杆菌%H1a基因%原核表达%免疫原性
甲型副傷寒桿菌%H1a基因%原覈錶達%免疫原性
갑형부상한간균%H1a기인%원핵표체%면역원성
目的构建甲型副伤寒杆菌(Salmonella paratyphi A)H1a基因原核表达系统,确定表达产物rH1a免疫原性和保护作用,检测甲型副伤寒杆菌临床菌株H1 a基因携带和表达情况.方法采用高保真PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增H1a基因,T-A克隆后测序,构建H1a基因原核表达系统pET32a-H1a-E.coli BL21DE3.采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查rH1a表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集rH1a.采用Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性.建立PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株H1a基因携带和表达频率.观察rH1a对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用.结果与报道的相关序列比较,所克隆的H1a基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为99.59%.rH1a表达量为细菌总蛋白的60%左右.甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rH1a并与之结合.rH1a免疫家兔可产生抗体.100%(98/98)甲型副伤寒杆菌临床菌株均含有H1a基因并表达H1a.500μgrH1a灌喂或皮下注射免疫小鼠受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率均为50.0%,若加入5μgrLTB,存活率分别上升至75.0%和66.7%.结论本研究成功地从甲型副伤寒杆菌临床菌株中构建了H1a基因高效原核表达系统.rH1a有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用.甲型副伤寒杆菌临床菌株广泛存在H1a基因并高频率表达.
目的構建甲型副傷寒桿菌(Salmonella paratyphi A)H1a基因原覈錶達繫統,確定錶達產物rH1a免疫原性和保護作用,檢測甲型副傷寒桿菌臨床菌株H1 a基因攜帶和錶達情況.方法採用高保真PCR從甲型副傷寒桿菌臨床株JH01中擴增H1a基因,T-A剋隆後測序,構建H1a基因原覈錶達繫統pET32a-H1a-E.coli BL21DE3.採用SDS-PAGE和BioRad凝膠圖象分析繫統檢查rH1a錶達情況,Ni-NTA親和層析法收集rH1a.採用Western blot鑒定其免疫反應性和免疫原性.建立PCR和ELISA檢測98株甲型副傷寒桿菌臨床菌株H1a基因攜帶和錶達頻率.觀察rH1a對甲型副傷寒桿菌50001株感染小鼠的免疫保護作用.結果與報道的相關序列比較,所剋隆的H1a基因覈苷痠和氨基痠序列相似性均為99.59%.rH1a錶達量為細菌總蛋白的60%左右.甲型副傷寒桿菌全菌抗血清能識彆rH1a併與之結閤.rH1a免疫傢兔可產生抗體.100%(98/98)甲型副傷寒桿菌臨床菌株均含有H1a基因併錶達H1a.500μgrH1a灌餵或皮下註射免疫小鼠受甲型副傷寒桿菌50001株攻擊後的存活率均為50.0%,若加入5μgrLTB,存活率分彆上升至75.0%和66.7%.結論本研究成功地從甲型副傷寒桿菌臨床菌株中構建瞭H1a基因高效原覈錶達繫統.rH1a有良好的免疫原性和一定的免疫保護作用.甲型副傷寒桿菌臨床菌株廣汎存在H1a基因併高頻率錶達.
목적구건갑형부상한간균(Salmonella paratyphi A)H1a기인원핵표체계통,학정표체산물rH1a면역원성화보호작용,검측갑형부상한간균림상균주H1 a기인휴대화표체정황.방법채용고보진PCR종갑형부상한간균림상주JH01중확증H1a기인,T-A극륭후측서,구건H1a기인원핵표체계통pET32a-H1a-E.coli BL21DE3.채용SDS-PAGE화BioRad응효도상분석계통검사rH1a표체정황,Ni-NTA친화층석법수집rH1a.채용Western blot감정기면역반응성화면역원성.건립PCR화ELISA검측98주갑형부상한간균림상균주H1a기인휴대화표체빈솔.관찰rH1a대갑형부상한간균50001주감염소서적면역보호작용.결과여보도적상관서렬비교,소극륭적H1a기인핵감산화안기산서렬상사성균위99.59%.rH1a표체량위세균총단백적60%좌우.갑형부상한간균전균항혈청능식별rH1a병여지결합.rH1a면역가토가산생항체.100%(98/98)갑형부상한간균림상균주균함유H1a기인병표체H1a.500μgrH1a관위혹피하주사면역소서수갑형부상한간균50001주공격후적존활솔균위50.0%,약가입5μgrLTB,존활솔분별상승지75.0%화66.7%.결론본연구성공지종갑형부상한간균림상균주중구건료H1a기인고효원핵표체계통.rH1a유량호적면역원성화일정적면역보호작용.갑형부상한간균림상균주엄범존재H1a기인병고빈솔표체.
