CAJ | 학술논문

目的:在神经干细胞的分离培养过程中,国内外的报道多数是用胰蛋白酶对组织细胞进行消化,但是消化时间比较难把握.采用胰酶消化与机械分离法相结合的方式对昆明种小鼠胚胎脑神经干细胞进行分离、培养和初步的免疫组织化学检测,为相关研究建立实验条件.方法:实验于2006-10/2007-09在广西医科大学基础医学实验室完成.实验室为广西重点实验室、基础医学博士后工作站. ①实验材料:孕14～16 d的昆明种小鼠由广西医科大学实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:分离昆明种小鼠胎鼠的脑组织,经胰酶消化加机械吹打后,在加入碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的B27无血清培养基中培养.③实验评估:用免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞.结果:在无血清DMEM/F12培养液中,加入碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子及B27的条件下,培养24 h后可见细胞以悬浮方式生长,三五聚集成团块,48 h后形成由十数个至数十个细胞组成的,大小不等的细胞球,形态规则,细胞无突起,形成典型的神经球,可传代.免疫细胞化学法检测显示,细胞表达神经巢蛋白.结论:①来自昆明种小鼠胎脑的神经干细胞能在体外培养、增殖并具有增殖传代能力.②无血清B27培养基添加表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子有利于神经干细胞的体外培养和促进其增殖.
목적:재신경간세포적분리배양과정중,국내외적보도다수시용이단백매대조직세포진행소화,단시소화시간비교난파악.채용이매소화여궤계분리법상결합적방식대곤명충소서배태뇌신경간세포진행분리、배양화초보적면역조직화학검측,위상관연구건립실험조건.방법:실험우2006-10/2007-09재엄서의과대학기출의학실험실완성.실험실위엄서중점실험실、기출의학박사후공작참. ①실험재료:잉14～16 d적곤명충소서유엄서의과대학실험동물중심제공,실험과정중대동물처치부합동물윤리학표준.②실험방법:분리곤명충소서태서적뇌조직,경이매소화가궤계취타후,재가입감성성섬유세포생장인자화표피세포생장인자적B27무혈청배양기중배양.③실험평고:용면역세포화학방법감정분리적신경간세포.결과:재무혈청DMEM/F12배양액중,가입감성성섬유세포생장인자、표피세포생장인자급B27적조건하,배양24 h후가견세포이현부방식생장,삼오취집성단괴,48 h후형성유십수개지수십개세포조성적,대소불등적세포구,형태규칙,세포무돌기,형성전형적신경구,가전대.면역세포화학법검측현시,세포표체신경소단백.결론:①래자곤명충소서태뇌적신경간세포능재체외배양、증식병구유증식전대능력.②무혈청B27배양기첨가표피세포생장인자、감성성섬유세포생장인자유리우신경간세포적체외배양화촉진기증식.