微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2008年
2期
241-248
,共8页
郭蓓%胡磊%盖颖%王喜智%陈雪梅%蒋湘宁
郭蓓%鬍磊%蓋穎%王喜智%陳雪梅%蔣湘寧
곽배%호뢰%개영%왕희지%진설매%장상저
拟南芥%海藻糖酶%基因克隆%功能表达
擬南芥%海藻糖酶%基因剋隆%功能錶達
의남개%해조당매%기인극륭%공능표체
从拟南芥幼苗中提取RNA,通过RT-PCR克隆得到海藻糖酶基因后,将其构建到原核高效表达载体pET30a(+)上并在大肠杆菌BL21菌株中进行高效诱导表达,继而对纯化得到的海藻糖酶蛋白进行活性检测和酶学特性研究.实验结果表明,植物源的海藻糖酶基因在异体大肠杆菌中能够高效表达,纯化获得的海藻糖酶蛋白在试管条件下具有较高的海藻糖水解活性,其活性最适温度为45℃.通过GC-MS分离检测,可以明显地看到酶反应过程中底物海藻糖和产物葡萄糖的含量随反应时间变化的消长关系,这充分证明克隆基因在大肠杆菌中的表达产物具有海藻糖酶的功能.
從擬南芥幼苗中提取RNA,通過RT-PCR剋隆得到海藻糖酶基因後,將其構建到原覈高效錶達載體pET30a(+)上併在大腸桿菌BL21菌株中進行高效誘導錶達,繼而對純化得到的海藻糖酶蛋白進行活性檢測和酶學特性研究.實驗結果錶明,植物源的海藻糖酶基因在異體大腸桿菌中能夠高效錶達,純化穫得的海藻糖酶蛋白在試管條件下具有較高的海藻糖水解活性,其活性最適溫度為45℃.通過GC-MS分離檢測,可以明顯地看到酶反應過程中底物海藻糖和產物葡萄糖的含量隨反應時間變化的消長關繫,這充分證明剋隆基因在大腸桿菌中的錶達產物具有海藻糖酶的功能.
종의남개유묘중제취RNA,통과RT-PCR극륭득도해조당매기인후,장기구건도원핵고효표체재체pET30a(+)상병재대장간균BL21균주중진행고효유도표체,계이대순화득도적해조당매단백진행활성검측화매학특성연구.실험결과표명,식물원적해조당매기인재이체대장간균중능구고효표체,순화획득적해조당매단백재시관조건하구유교고적해조당수해활성,기활성최괄온도위45℃.통과GC-MS분리검측,가이명현지간도매반응과정중저물해조당화산물포도당적함량수반응시간변화적소장관계,저충분증명극륭기인재대장간균중적표체산물구유해조당매적공능.
