CAJ | 학술논문

目的建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法.方法以肺癌细胞株NCI-H460作为RAssF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200 μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆.用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测.以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量.结果实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测最低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆).15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%).5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml.结论实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强.
목적 건립검측인혈장DNA중RASSF1A기인갑기화적방법.방법 이폐암세포주NCI-H460작위RAssF1A기인계동자구갑기화양성양본,전통분/록방법제취세포DNA,경자외분광광도계정량후이10배희석적농도제도의차투입도200 μl건강인혈장중,제비득도모의폐암환자혈장.용자주법종모의혈장양본화15례조기폐암환자혈장중제취총DNA.대혈장DNA모판진행아류산경염화학수식,병이TaqMan기술적실시형광정량갑기화특이성PCR(MSP)진행검측.이모의혈장양품작위표준품,용외표준곡선법대폐암환자혈장중적갑기화RASSF1A진행정량.결과 실시형광정량MSP대모의폐암환자혈장적검측최저한위150고패(갑기화적종류DNA)/ml(혈장).15례폐암환자5례RASSF1A갑기화양성(33.3%).5례폐암환자혈장중갑기화적RASSF1A기인적농도분별위2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104화4.24×104고패/ml.결론 실시형광정량MSP법검측폐암환자혈장DNA중RASSF1A기인갑기화,령민도고,특이성강.