西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2009年
6期
1104-1110
,共7页
王飞%邢新生%马有志%陈耀锋%曹新有
王飛%邢新生%馬有誌%陳耀鋒%曹新有
왕비%형신생%마유지%진요봉%조신유
烟草%根癌农杆菌%转化效率%D32基因
煙草%根癌農桿菌%轉化效率%D32基因
연초%근암농간균%전화효솔%D32기인
以烟草品种'中烟99'的无菌苗叶片为转化受体材料,通过根癌农杆菌C58C1介导对大豆中克隆的抗逆性基因D32进行转化,获得了抗卡那霉素的再生植株,并对转化植株进行了PCR检测.结果表明,烟草叶片分化和再生的卡那霉素选择压力为150 mg/L;外植体预培养对转化率有影响;优化的烟草转化方法是:经预培养2 d的外植体用OD600值为0.7的菌液侵染5 min, 共培养2 d后用无菌水冲洗5～6次,羧苄青霉素(Cb)和头孢霉素(Cef)浓度为400 mg/L的脱菌液浸泡120 min,超净工作台上吹风60 min,于筛选分化培养基生长50 d,可获得26.7%卡那抗性苗.对抗性植株经PCR检测证明,外源D32基因已初步整合到烟草基因组中.
以煙草品種'中煙99'的無菌苗葉片為轉化受體材料,通過根癌農桿菌C58C1介導對大豆中剋隆的抗逆性基因D32進行轉化,穫得瞭抗卡那黴素的再生植株,併對轉化植株進行瞭PCR檢測.結果錶明,煙草葉片分化和再生的卡那黴素選擇壓力為150 mg/L;外植體預培養對轉化率有影響;優化的煙草轉化方法是:經預培養2 d的外植體用OD600值為0.7的菌液侵染5 min, 共培養2 d後用無菌水遲洗5～6次,羧芐青黴素(Cb)和頭孢黴素(Cef)濃度為400 mg/L的脫菌液浸泡120 min,超淨工作檯上吹風60 min,于篩選分化培養基生長50 d,可穫得26.7%卡那抗性苗.對抗性植株經PCR檢測證明,外源D32基因已初步整閤到煙草基因組中.
이연초품충'중연99'적무균묘협편위전화수체재료,통과근암농간균C58C1개도대대두중극륭적항역성기인D32진행전화,획득료항잡나매소적재생식주,병대전화식주진행료PCR검측.결과표명,연초협편분화화재생적잡나매소선택압력위150 mg/L;외식체예배양대전화솔유영향;우화적연초전화방법시:경예배양2 d적외식체용OD600치위0.7적균액침염5 min, 공배양2 d후용무균수충세5～6차,최변청매소(Cb)화두포매소(Cef)농도위400 mg/L적탈균액침포120 min,초정공작태상취풍60 min,우사선분화배양기생장50 d,가획득26.7%잡나항성묘.대항성식주경PCR검측증명,외원D32기인이초보정합도연초기인조중.
