CAJ | 학술논문

背景与目的:与传统的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)/丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)肿瘤自杀系统相比,人钠/碘同向转运体(human sodium-iodide symporter,hNIS)是近年来发现的新型治疗基因.然而,两者的疗效尚需进一步提高.本研究旨在探索hNIS介导的放射性核素体系与HSV-TK/GCV自杀基因体系对肝癌细胞的联合毒性作用.方法:构建EF1-a启动子调控下的hNIS的表达载体与CMV启动子调控下的GFP和HSV-TK共表达载体,慢病毒包装后转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察重组肿瘤细胞HepG2/NTG荧光蛋白的表达;采用RT-PCR技术进一步检测目的基因hNIS和HSV-TK的表达情况;MTT检测GCV对HepG2/NTG的杀伤作用;摄碘试验及流出试验评价HepG2/NTG对碘的摄取及滞留情况;最后通过克隆形成实验评价GCV和131I对HepG2/NTG的单独及联合杀伤作用.结果:RT-PCR技术、荧光显像证实hNIS、GFP和HSV-TK基因在肝癌细胞中成功表达;与对照组相比,HepG2/NTG的摄碘高出76倍,20 min摄碘率最高,其后表现出碘外流,有效半衰期不到10 min,同时这种碘摄取能被NaClO4特异性抑制.GCV或131I对HepG2/NTG的毒性作用呈现剂量依赖性:50μg/mL GCV作用72 h后,实验组细胞的存活率仅为(33.98±2.71)%;放射性浓度为7.4MBq/mL的131I处理7 h后,细胞的存活率仅为(41.17±0.72)%;GCV和131I联合作用后,细胞的存活率仅为(8.55±1.22)%,较单一药物作用细胞存活率下降了6倍.结论:131I/GCV对重组肝癌细胞产生显著的毒性作用,提示慢病毒介导hNIS/TK基因共转染介导肿瘤的放射化学治疗是可行的.
배경여목적:여전통적단순포진병독흉감격매(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)/병양조감(ganciclovir,GCV)종류자살계통상비,인납/전동향전운체(human sodium-iodide symporter,hNIS)시근년래발현적신형치료기인.연이,량자적료효상수진일보제고.본연구지재탐색hNIS개도적방사성핵소체계여HSV-TK/GCV자살기인체계대간암세포적연합독성작용.방법:구건EF1-a계동자조공하적hNIS적표체재체여CMV계동자조공하적GFP화HSV-TK공표체재체,만병독포장후전염간암세포HepG2,형광현미경하관찰중조종류세포HepG2/NTG형광단백적표체;채용RT-PCR기술진일보검측목적기인hNIS화HSV-TK적표체정황;MTT검측GCV대HepG2/NTG적살상작용;섭전시험급류출시험평개HepG2/NTG대전적섭취급체류정황;최후통과극륭형성실험평개GCV화131I대HepG2/NTG적단독급연합살상작용.결과:RT-PCR기술、형광현상증실hNIS、GFP화HSV-TK기인재간암세포중성공표체;여대조조상비,HepG2/NTG적섭전고출76배,20 min섭전솔최고,기후표현출전외류,유효반쇠기불도10 min,동시저충전섭취능피NaClO4특이성억제.GCV혹131I대HepG2/NTG적독성작용정현제량의뢰성:50μg/mL GCV작용72 h후,실험조세포적존활솔부위(33.98±2.71)%;방사성농도위7.4MBq/mL적131I처리7 h후,세포적존활솔부위(41.17±0.72)%;GCV화131I연합작용후,세포적존활솔부위(8.55±1.22)%,교단일약물작용세포존활솔하강료6배.결론:131I/GCV대중조간암세포산생현저적독성작용,제시만병독개도hNIS/TK기인공전염개도종류적방사화학치료시가행적.