生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
1期
11-14
,共4页
杨晓鹏%刘波%巩新%唱韶红%张义浜%吴军
楊曉鵬%劉波%鞏新%唱韶紅%張義浜%吳軍
양효붕%류파%공신%창소홍%장의빈%오군
人可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ%IgG Fc%融合蛋白%乳酸克鲁维酵母
人可溶性腫瘤壞死因子受體Ⅱ%IgG Fc%融閤蛋白%乳痠剋魯維酵母
인가용성종류배사인자수체Ⅱ%IgG Fc%융합단백%유산극로유효모
目的:在乳酸克鲁维酵母中表达人可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFRⅡ)与IgG Fc的融合蛋白.方法:首先获得sTNFRⅡ-IgGFc融合基因片段,然后构建至乳酸克鲁维酵母表达载体pKLACl中,获得sTNFRⅡ-IgGFc的表达载体,并将其电转化乳酸克鲁维酵母(△ura3).通过ELISA方法筛选高表达sTNFRⅡ-IgGFc融合蛋白的重组乳酸克鲁维酵母菌株,采用还原和非还原SDS-PAGE分析融合蛋白是否形成二聚体结构.Western印迹验证sTNFRⅡ-IgGFc融合蛋白在乳酸克鲁维酵母(△ura3)中的表达.结果:构建了sTNFRⅡ-IgGFc表达载体pKLACl一sTNFRⅡ-IgGFc,获得了表达sTNFRⅡ-IgGFc的乳酸克鲁维酵母菌株,SDS-PAGE和Western印迹表明该融合蛋白能自发形成类似于抗体的二聚体结构.结论:实现了sTNFRⅡ-igGFc融合蛋白在乳酸克鲁维酵母(△ura3)中的表达.
目的:在乳痠剋魯維酵母中錶達人可溶性腫瘤壞死因子受體Ⅱ(sTNFRⅡ)與IgG Fc的融閤蛋白.方法:首先穫得sTNFRⅡ-IgGFc融閤基因片段,然後構建至乳痠剋魯維酵母錶達載體pKLACl中,穫得sTNFRⅡ-IgGFc的錶達載體,併將其電轉化乳痠剋魯維酵母(△ura3).通過ELISA方法篩選高錶達sTNFRⅡ-IgGFc融閤蛋白的重組乳痠剋魯維酵母菌株,採用還原和非還原SDS-PAGE分析融閤蛋白是否形成二聚體結構.Western印跡驗證sTNFRⅡ-IgGFc融閤蛋白在乳痠剋魯維酵母(△ura3)中的錶達.結果:構建瞭sTNFRⅡ-IgGFc錶達載體pKLACl一sTNFRⅡ-IgGFc,穫得瞭錶達sTNFRⅡ-IgGFc的乳痠剋魯維酵母菌株,SDS-PAGE和Western印跡錶明該融閤蛋白能自髮形成類似于抗體的二聚體結構.結論:實現瞭sTNFRⅡ-igGFc融閤蛋白在乳痠剋魯維酵母(△ura3)中的錶達.
목적:재유산극로유효모중표체인가용성종류배사인자수체Ⅱ(sTNFRⅡ)여IgG Fc적융합단백.방법:수선획득sTNFRⅡ-IgGFc융합기인편단,연후구건지유산극로유효모표체재체pKLACl중,획득sTNFRⅡ-IgGFc적표체재체,병장기전전화유산극로유효모(△ura3).통과ELISA방법사선고표체sTNFRⅡ-IgGFc융합단백적중조유산극로유효모균주,채용환원화비환원SDS-PAGE분석융합단백시부형성이취체결구.Western인적험증sTNFRⅡ-IgGFc융합단백재유산극로유효모(△ura3)중적표체.결과:구건료sTNFRⅡ-IgGFc표체재체pKLACl일sTNFRⅡ-IgGFc,획득료표체sTNFRⅡ-IgGFc적유산극로유효모균주,SDS-PAGE화Western인적표명해융합단백능자발형성유사우항체적이취체결구.결론:실현료sTNFRⅡ-igGFc융합단백재유산극로유효모(△ura3)중적표체.
