植物遗传资源学报
植物遺傳資源學報
식물유전자원학보
JOURNAL OF PLANT GENETLC RESOURCES
2011年
1期
92-95,102
,共5页
刘沛%徐兆师%晏月明%李连城%陈明%马有志
劉沛%徐兆師%晏月明%李連城%陳明%馬有誌
류패%서조사%안월명%리련성%진명%마유지
小麦%MAPK 蛋白激酶%原核表达%蛋白纯化%多克隆抗体
小麥%MAPK 蛋白激酶%原覈錶達%蛋白純化%多剋隆抗體
소맥%MAPK 단백격매%원핵표체%단백순화%다극륭항체
MAPK蛋白激酶是一类重要的植物胁迫信号调控因子.为了研究小麦MAPK基因的功能,苯试验克隆了小麦MAPK蛋白激酶基因TaMAPK2.为了制备TaMAPK2基因的多克隆抗体,TaMAPK2的非保守区段的DNA序列anti-MAPK2被构建到原核表达载体 pET-28a-(+)上,表达融合蛋白His-antiMAPK2.在终浓度为1 mmol/L IPTG诱导1h的条件下,融合蛋白His-antiMAPK2表达量达到最大.通过蛋白标记亲和层析柱(HisTrapTMHP)得到纯化的His-antiMAPK2融合蛋白.利用新西兰大白兔制备了TaMAPK2基因的多克隆抗体,ELISA竞争抑制法检测抗体效价检测,效价为1:80000,能满足后续试验要求的效价值,为进一步分析TaMAPK2的蛋白定位、表达等提供基础.
MAPK蛋白激酶是一類重要的植物脅迫信號調控因子.為瞭研究小麥MAPK基因的功能,苯試驗剋隆瞭小麥MAPK蛋白激酶基因TaMAPK2.為瞭製備TaMAPK2基因的多剋隆抗體,TaMAPK2的非保守區段的DNA序列anti-MAPK2被構建到原覈錶達載體 pET-28a-(+)上,錶達融閤蛋白His-antiMAPK2.在終濃度為1 mmol/L IPTG誘導1h的條件下,融閤蛋白His-antiMAPK2錶達量達到最大.通過蛋白標記親和層析柱(HisTrapTMHP)得到純化的His-antiMAPK2融閤蛋白.利用新西蘭大白兔製備瞭TaMAPK2基因的多剋隆抗體,ELISA競爭抑製法檢測抗體效價檢測,效價為1:80000,能滿足後續試驗要求的效價值,為進一步分析TaMAPK2的蛋白定位、錶達等提供基礎.
MAPK단백격매시일류중요적식물협박신호조공인자.위료연구소맥MAPK기인적공능,분시험극륭료소맥MAPK단백격매기인TaMAPK2.위료제비TaMAPK2기인적다극륭항체,TaMAPK2적비보수구단적DNA서렬anti-MAPK2피구건도원핵표체재체 pET-28a-(+)상,표체융합단백His-antiMAPK2.재종농도위1 mmol/L IPTG유도1h적조건하,융합단백His-antiMAPK2표체량체도최대.통과단백표기친화층석주(HisTrapTMHP)득도순화적His-antiMAPK2융합단백.이용신서란대백토제비료TaMAPK2기인적다극륭항체,ELISA경쟁억제법검측항체효개검측,효개위1:80000,능만족후속시험요구적효개치,위진일보분석TaMAPK2적단백정위、표체등제공기출.
