军医进修学院学报
軍醫進脩學院學報
군의진수학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF PLA POSTGRADUATE MEDICAL SCHOOL
2011年
12期
1263-1265
,共3页
刘瑜%谷昭艳%李春霖%陈凤玲%胡仁明
劉瑜%穀昭豔%李春霖%陳鳳玲%鬍仁明
류유%곡소염%리춘림%진봉령%호인명
BTBD10%原核表达%多克隆抗体
BTBD10%原覈錶達%多剋隆抗體
BTBD10%원핵표체%다극륭항체
目的 克隆和表达BTBD10基因,为进一步研究BTBD 10与胰岛细胞增殖功能提供工具.方法 制备兔抗BTBD10多克隆抗体,利用PCR方法扩增BTBD10全长,经Bam H I和Sal I酶切后连接入pET32a原核表达载体,将重组表达质粒pET32a-BTBD 10转化大肠杆菌ROSSET,经IPTG诱导表达蛋白,并以亲和层析的方法进行纯化,以纯化的BTBD10蛋白免疫新两兰大白兔,制备兔抗BTBD10的多克隆抗体,利用Western blot方法分析鉴定.结果 经双酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的BTBD10读码框.SDS-PAGE电泳分析显示IPTG诱导后表达约85kU的融合蛋白,与预期结果相符.将纯化的融合蛋白免疫家兔,获得兔抗BTBD10多克隆抗体血清,Western blot结果显示该抗体特异性好,效价高,目的条带位于56kU处.结论 成功构建人BTBD10原核表达载体,并获得了高纯度BTBD10重组蛋白及兔抗BTBD10多克隆抗体.
目的 剋隆和錶達BTBD10基因,為進一步研究BTBD 10與胰島細胞增殖功能提供工具.方法 製備兔抗BTBD10多剋隆抗體,利用PCR方法擴增BTBD10全長,經Bam H I和Sal I酶切後連接入pET32a原覈錶達載體,將重組錶達質粒pET32a-BTBD 10轉化大腸桿菌ROSSET,經IPTG誘導錶達蛋白,併以親和層析的方法進行純化,以純化的BTBD10蛋白免疫新兩蘭大白兔,製備兔抗BTBD10的多剋隆抗體,利用Western blot方法分析鑒定.結果 經雙酶切和覈痠序列分析證實重組質粒包含有正確編碼的BTBD10讀碼框.SDS-PAGE電泳分析顯示IPTG誘導後錶達約85kU的融閤蛋白,與預期結果相符.將純化的融閤蛋白免疫傢兔,穫得兔抗BTBD10多剋隆抗體血清,Western blot結果顯示該抗體特異性好,效價高,目的條帶位于56kU處.結論 成功構建人BTBD10原覈錶達載體,併穫得瞭高純度BTBD10重組蛋白及兔抗BTBD10多剋隆抗體.
목적 극륭화표체BTBD10기인,위진일보연구BTBD 10여이도세포증식공능제공공구.방법 제비토항BTBD10다극륭항체,이용PCR방법확증BTBD10전장,경Bam H I화Sal I매절후련접입pET32a원핵표체재체,장중조표체질립pET32a-BTBD 10전화대장간균ROSSET,경IPTG유도표체단백,병이친화층석적방법진행순화,이순화적BTBD10단백면역신량란대백토,제비토항BTBD10적다극륭항체,이용Western blot방법분석감정.결과 경쌍매절화핵산서렬분석증실중조질립포함유정학편마적BTBD10독마광.SDS-PAGE전영분석현시IPTG유도후표체약85kU적융합단백,여예기결과상부.장순화적융합단백면역가토,획득토항BTBD10다극륭항체혈청,Western blot결과현시해항체특이성호,효개고,목적조대위우56kU처.결론 성공구건인BTBD10원핵표체재체,병획득료고순도BTBD10중조단백급토항BTBD10다극륭항체.
