林业科学
林業科學
임업과학
SCIENTIA SILVAE SINICAE
2012年
3期
88-94
,共7页
陈凤毛%叶建仁%吴小芹%黄麟%谈家金
陳鳳毛%葉建仁%吳小芹%黃麟%談傢金
진봉모%협건인%오소근%황린%담가금
松材线虫%SCAR标记%特异引物%检测技术
鬆材線蟲%SCAR標記%特異引物%檢測技術
송재선충%SCAR표기%특이인물%검측기술
将松材线虫RAPD特异片段OPM05-X21.进行分离、回收,与载体pGEM·-T Vector连接,转化大肠杆菌并培养,对目标克隆测序.根据测序结果,用Oligo5.0软件设计引物,正向引物为MmF2(5′-CGGGT CATGG CTGGAgGTAT CGT-3′),反向引物为M05R1(5′-TGGCT CAATGgCAAAtCCTTCGTA-3′),成功地将松材线虫特异片段OPM05-X2100通过引物对M05 F2/R1转化为SCAR-m05-X600.运用SCAR标记引物M05F2/R对枯死松树体内分离的92份线虫样本的DNA进行标记,并对单条线虫经简易方法提取的DNA进行检测.结果表明:引物组合对所有81份松材线虫株系均扩增出一条600bp的清晰、明亮的条带,而对8份拟松材线虫、1份霍夫曼尼伞滑刃线虫、1份大核滑刃线虫、1份长尾属线虫均无扩增产物.该对引物可以检测单条松材线虫.利用这对特异引物组合可构建松材线虫检测试剂盒,实现对松材线虫的快速检测的目标.
將鬆材線蟲RAPD特異片段OPM05-X21.進行分離、迴收,與載體pGEM·-T Vector連接,轉化大腸桿菌併培養,對目標剋隆測序.根據測序結果,用Oligo5.0軟件設計引物,正嚮引物為MmF2(5′-CGGGT CATGG CTGGAgGTAT CGT-3′),反嚮引物為M05R1(5′-TGGCT CAATGgCAAAtCCTTCGTA-3′),成功地將鬆材線蟲特異片段OPM05-X2100通過引物對M05 F2/R1轉化為SCAR-m05-X600.運用SCAR標記引物M05F2/R對枯死鬆樹體內分離的92份線蟲樣本的DNA進行標記,併對單條線蟲經簡易方法提取的DNA進行檢測.結果錶明:引物組閤對所有81份鬆材線蟲株繫均擴增齣一條600bp的清晰、明亮的條帶,而對8份擬鬆材線蟲、1份霍伕曼尼傘滑刃線蟲、1份大覈滑刃線蟲、1份長尾屬線蟲均無擴增產物.該對引物可以檢測單條鬆材線蟲.利用這對特異引物組閤可構建鬆材線蟲檢測試劑盒,實現對鬆材線蟲的快速檢測的目標.
장송재선충RAPD특이편단OPM05-X21.진행분리、회수,여재체pGEM·-T Vector련접,전화대장간균병배양,대목표극륭측서.근거측서결과,용Oligo5.0연건설계인물,정향인물위MmF2(5′-CGGGT CATGG CTGGAgGTAT CGT-3′),반향인물위M05R1(5′-TGGCT CAATGgCAAAtCCTTCGTA-3′),성공지장송재선충특이편단OPM05-X2100통과인물대M05 F2/R1전화위SCAR-m05-X600.운용SCAR표기인물M05F2/R대고사송수체내분리적92빈선충양본적DNA진행표기,병대단조선충경간역방법제취적DNA진행검측.결과표명:인물조합대소유81빈송재선충주계균확증출일조600bp적청석、명량적조대,이대8빈의송재선충、1빈곽부만니산활인선충、1빈대핵활인선충、1빈장미속선충균무확증산물.해대인물가이검측단조송재선충.이용저대특이인물조합가구건송재선충검측시제합,실현대송재선충적쾌속검측적목표.
