中国现代医学杂志
中國現代醫學雜誌
중국현대의학잡지
CHINA JOURNAL OF MODERN MEDICINE
2006年
9期
1314-1316,1321
,共4页
万小平%李小荣%谭辉%何峰%裴海平%申竑%李小刚
萬小平%李小榮%譚輝%何峰%裴海平%申竑%李小剛
만소평%리소영%담휘%하봉%배해평%신횡%리소강
Cre-loxP特异性位点基因重组%BMP4%基因重组腺病毒
Cre-loxP特異性位點基因重組%BMP4%基因重組腺病毒
Cre-loxP특이성위점기인중조%BMP4%기인중조선병독
目的利用Cre-loxP特异性位点基因重组技术构建大鼠骨形成蛋白BMP4的重组腺病毒.方法高保真PCR得到大鼠BMP4 cDNA,克隆到质粒pCR-Blunt Ⅱ-TOPO中,然后将目的基因片段连接到中间载体质粒pDNR-CMV,测序后在Cre重组酶作用下,将BMP4 cDNA转移到腺病毒载体pLP-Ade-no-X-CMV.在HEK 293细胞中扩增重组腺病毒,并检测BMP4基因重组腺病毒在细胞中的表达和功能.结果PCR法和限制性内切酶Xhol I消化法均证实BMP4重组腺病毒的成功构建,RT-PCR和Western Blot检测证实该重组腺病毒显著性增强了CFSC-2G细胞中BMP4的mRNA和蛋白表达水平.结论Cre-loxP特异性位点基因重组技术是一种快速、高效构建基因重组腺病毒的方法,大鼠BMP4基因重组腺病毒的成功构建为进一步研究BMP4的细胞调控功能和BMP4基因治疗提供了良好的工具.
目的利用Cre-loxP特異性位點基因重組技術構建大鼠骨形成蛋白BMP4的重組腺病毒.方法高保真PCR得到大鼠BMP4 cDNA,剋隆到質粒pCR-Blunt Ⅱ-TOPO中,然後將目的基因片段連接到中間載體質粒pDNR-CMV,測序後在Cre重組酶作用下,將BMP4 cDNA轉移到腺病毒載體pLP-Ade-no-X-CMV.在HEK 293細胞中擴增重組腺病毒,併檢測BMP4基因重組腺病毒在細胞中的錶達和功能.結果PCR法和限製性內切酶Xhol I消化法均證實BMP4重組腺病毒的成功構建,RT-PCR和Western Blot檢測證實該重組腺病毒顯著性增彊瞭CFSC-2G細胞中BMP4的mRNA和蛋白錶達水平.結論Cre-loxP特異性位點基因重組技術是一種快速、高效構建基因重組腺病毒的方法,大鼠BMP4基因重組腺病毒的成功構建為進一步研究BMP4的細胞調控功能和BMP4基因治療提供瞭良好的工具.
목적이용Cre-loxP특이성위점기인중조기술구건대서골형성단백BMP4적중조선병독.방법고보진PCR득도대서BMP4 cDNA,극륭도질립pCR-Blunt Ⅱ-TOPO중,연후장목적기인편단련접도중간재체질립pDNR-CMV,측서후재Cre중조매작용하,장BMP4 cDNA전이도선병독재체pLP-Ade-no-X-CMV.재HEK 293세포중확증중조선병독,병검측BMP4기인중조선병독재세포중적표체화공능.결과PCR법화한제성내절매Xhol I소화법균증실BMP4중조선병독적성공구건,RT-PCR화Western Blot검측증실해중조선병독현저성증강료CFSC-2G세포중BMP4적mRNA화단백표체수평.결론Cre-loxP특이성위점기인중조기술시일충쾌속、고효구건기인중조선병독적방법,대서BMP4기인중조선병독적성공구건위진일보연구BMP4적세포조공공능화BMP4기인치료제공료량호적공구.
