CAJ | 학술논문

目的:通过检测血特异的内皮细胞标记物管性假血友病因子,观察骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死后大鼠局部新生血管情况,并探讨内皮血管功能指标E-选择素与新生血管的关系.方法:实验于2005-09/2006-06在唐山工人医院中心实验室完成.①选用清洁级健康近交系SD大鼠40只,随机数字表法分为假手术组、模型对照组、干细胞移植组、细胞培养基组,10只/组.②另取1只大鼠用于骨髓间充质干细胞的提取.大鼠处死后无菌条件下分离股骨和胫骨,应用密度梯度法分离培养骨髓间充质干细胞.待细胞80%贴满培养瓶底时,用乙二胺四乙酸和胰蛋白酶混合消化传代.将50 mg/L 4,6-二脒-2～苯基吲哚加入第3代细胞培养基中,制成细胞悬液备用.③术前各组大鼠均行气管插管,建立急性心肌梗死模型,以远端供血区心肌组织颜色苍白、心电图检测Ⅱ导联ST段持续抬高为模型建立成功的标志.假手术组仅开胸予以前降支穿线但不结扎.④造模成功后1～3 h,干细胞移植组用微量注射器吸取4,6-二脒-2-苯基吲哚标记好的第3代骨髓间充质干细胞悬液50 μL,直接注入梗死区边缘心肌组织.细胞培养基组按干细胞移植组的方法于相同部位注射等量无血清DMEM低糖培养基(pH值为6.9),模型对照组仅制作心肌梗死模型不作其他处理,假手术组亦不作其他处理.⑤造模后2,4周各组处死半数大鼠,切取心脏组织,于梗死边缘区心肌组织制作切片,荧光显微镜下观察4,6-二脒-2-苯基吲哚标记的供体细胞.链霉亲和素免疫组化法检测心肌细胞中血管性假血友病因子评估新生血管情况,酶联免疫吸附法测定血清E-选择素含量,评估内皮功能.结果:40只大鼠均进入结果分析.①各组大鼠心脏标本4,6-二脒-2-苯基吲哚标记移植细胞存活状况:骨髓干细胞移植治疗后,荧光显微镜下可见成团和散在的DAPI阳性细胞,其余3组大鼠心脏标本中均未见荧光细胞.②各组大鼠血清E-选择素的检测:心肌梗死后2,4周模型对照组及细胞培养基组E-选择素明显增高,与假手术组比较差异显著[2周:(36.04±4.47),(34.10±2.04),(13.37±3.01) μg/L;4周:(33.02±4.78),(33.96±5.18),(13.94±2.87)μg/L,P＜0.01],干细胞组移植组E-选择素较模型对照组明显降低[2周:(24.29±3.51),(36.04±4.47)μg/L;4周:(17.45±3.22),(33.02±4.78)μg/L,P＜0.05].③各组大鼠心肌组织血管性假血友病因子表达情况:链霉亲和素免疫组化法显示,造模后2周干细胞移植组心肌细胞血管性假血友病因子呈强阳性表达,模型对照组和细胞培养基组血管性假血友病因子表达减弱.造模后4周干细胞移植组心肌细胞血管性假血友病因子表达仍呈强阳性,模型对照组和细胞培养基组血管性假血友病因子表达有减弱趋势.结论:①移入的骨髓间充质干细胞存活.②骨髓干细胞移植治疗实验性大鼠心肌梗死模型后,可提高心肌细胞血管性假血友病因子水平,促进局部血管新生.③移植后心肌梗死大鼠血清中E-选择素的降低,可能与其参与血管新生有关,同时也提示骨髓干细胞移植不会诱发E-选择素增高而加重动脉硬化. 目的:通過檢測血特異的內皮細胞標記物管性假血友病因子,觀察骨髓間充質榦細胞移植治療急性心肌梗死後大鼠跼部新生血管情況,併探討內皮血管功能指標E-選擇素與新生血管的關繫.方法:實驗于2005-09/2006-06在唐山工人醫院中心實驗室完成.①選用清潔級健康近交繫SD大鼠40隻,隨機數字錶法分為假手術組、模型對照組、榦細胞移植組、細胞培養基組,10隻/組.②另取1隻大鼠用于骨髓間充質榦細胞的提取.大鼠處死後無菌條件下分離股骨和脛骨,應用密度梯度法分離培養骨髓間充質榦細胞.待細胞80%貼滿培養瓶底時,用乙二胺四乙痠和胰蛋白酶混閤消化傳代.將50 mg/L 4,6-二脒-2～苯基吲哚加入第3代細胞培養基中,製成細胞懸液備用.③術前各組大鼠均行氣管插管,建立急性心肌梗死模型,以遠耑供血區心肌組織顏色蒼白、心電圖檢測Ⅱ導聯ST段持續抬高為模型建立成功的標誌.假手術組僅開胸予以前降支穿線但不結扎.④造模成功後1～3 h,榦細胞移植組用微量註射器吸取4,6-二脒-2-苯基吲哚標記好的第3代骨髓間充質榦細胞懸液50 μL,直接註入梗死區邊緣心肌組織.細胞培養基組按榦細胞移植組的方法于相同部位註射等量無血清DMEM低糖培養基(pH值為6.9),模型對照組僅製作心肌梗死模型不作其他處理,假手術組亦不作其他處理.⑤造模後2,4週各組處死半數大鼠,切取心髒組織,于梗死邊緣區心肌組織製作切片,熒光顯微鏡下觀察4,6-二脒-2-苯基吲哚標記的供體細胞.鏈黴親和素免疫組化法檢測心肌細胞中血管性假血友病因子評估新生血管情況,酶聯免疫吸附法測定血清E-選擇素含量,評估內皮功能.結果:40隻大鼠均進入結果分析.①各組大鼠心髒標本4,6-二脒-2-苯基吲哚標記移植細胞存活狀況:骨髓榦細胞移植治療後,熒光顯微鏡下可見成糰和散在的DAPI暘性細胞,其餘3組大鼠心髒標本中均未見熒光細胞.②各組大鼠血清E-選擇素的檢測:心肌梗死後2,4週模型對照組及細胞培養基組E-選擇素明顯增高,與假手術組比較差異顯著[2週:(36.04±4.47),(34.10±2.04),(13.37±3.01) μg/L;4週:(33.02±4.78),(33.96±5.18),(13.94±2.87)μg/L,P＜0.01],榦細胞組移植組E-選擇素較模型對照組明顯降低[2週:(24.29±3.51),(36.04±4.47)μg/L;4週:(17.45±3.22),(33.02±4.78)μg/L,P＜0.05].③各組大鼠心肌組織血管性假血友病因子錶達情況:鏈黴親和素免疫組化法顯示,造模後2週榦細胞移植組心肌細胞血管性假血友病因子呈彊暘性錶達,模型對照組和細胞培養基組血管性假血友病因子錶達減弱.造模後4週榦細胞移植組心肌細胞血管性假血友病因子錶達仍呈彊暘性,模型對照組和細胞培養基組血管性假血友病因子錶達有減弱趨勢.結論:①移入的骨髓間充質榦細胞存活.②骨髓榦細胞移植治療實驗性大鼠心肌梗死模型後,可提高心肌細胞血管性假血友病因子水平,促進跼部血管新生.③移植後心肌梗死大鼠血清中E-選擇素的降低,可能與其參與血管新生有關,同時也提示骨髓榦細胞移植不會誘髮E-選擇素增高而加重動脈硬化.
목적:통과검측혈특이적내피세포표기물관성가혈우병인자,관찰골수간충질간세포이식치료급성심기경사후대서국부신생혈관정황,병탐토내피혈관공능지표E-선택소여신생혈관적관계.방법:실험우2005-09/2006-06재당산공인의원중심실험실완성.①선용청길급건강근교계SD대서40지,수궤수자표법분위가수술조、모형대조조、간세포이식조、세포배양기조,10지/조.②령취1지대서용우골수간충질간세포적제취.대서처사후무균조건하분리고골화경골,응용밀도제도법분리배양골수간충질간세포.대세포80%첩만배양병저시,용을이알사을산화이단백매혼합소화전대.장50 mg/L 4,6-이미-2～분기신타가입제3대세포배양기중,제성세포현액비용.③술전각조대서균행기관삽관,건립급성심기경사모형,이원단공혈구심기조직안색창백、심전도검측Ⅱ도련ST단지속태고위모형건립성공적표지.가수술조부개흉여이전강지천선단불결찰.④조모성공후1～3 h,간세포이식조용미량주사기흡취4,6-이미-2-분기신타표기호적제3대골수간충질간세포현액50 μL,직접주입경사구변연심기조직.세포배양기조안간세포이식조적방법우상동부위주사등량무혈청DMEM저당배양기(pH치위6.9),모형대조조부제작심기경사모형불작기타처리,가수술조역불작기타처리.⑤조모후2,4주각조처사반수대서,절취심장조직,우경사변연구심기조직제작절편,형광현미경하관찰4,6-이미-2-분기신타표기적공체세포.련매친화소면역조화법검측심기세포중혈관성가혈우병인자평고신생혈관정황,매련면역흡부법측정혈청E-선택소함량,평고내피공능.결과:40지대서균진입결과분석.①각조대서심장표본4,6-이미-2-분기신타표기이식세포존활상황:골수간세포이식치료후,형광현미경하가견성단화산재적DAPI양성세포,기여3조대서심장표본중균미견형광세포.②각조대서혈청E-선택소적검측:심기경사후2,4주모형대조조급세포배양기조E-선택소명현증고,여가수술조비교차이현저[2주:(36.04±4.47),(34.10±2.04),(13.37±3.01) μg/L;4주:(33.02±4.78),(33.96±5.18),(13.94±2.87)μg/L,P＜0.01],간세포조이식조E-선택소교모형대조조명현강저[2주:(24.29±3.51),(36.04±4.47)μg/L;4주:(17.45±3.22),(33.02±4.78)μg/L,P＜0.05].③각조대서심기조직혈관성가혈우병인자표체정황:련매친화소면역조화법현시,조모후2주간세포이식조심기세포혈관성가혈우병인자정강양성표체,모형대조조화세포배양기조혈관성가혈우병인자표체감약.조모후4주간세포이식조심기세포혈관성가혈우병인자표체잉정강양성,모형대조조화세포배양기조혈관성가혈우병인자표체유감약추세.결론:①이입적골수간충질간세포존활.②골수간세포이식치료실험성대서심기경사모형후,가제고심기세포혈관성가혈우병인자수평,촉진국부혈관신생.③이식후심기경사대서혈청중E-선택소적강저,가능여기삼여혈관신생유관,동시야제시골수간세포이식불회유발E-선택소증고이가중동맥경화.