CAJ | 학술논문

背景:目前研究显示低氧诱导因子1α可诱导细胞周期停滞,但其机制尚不清楚.目的:研究重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α (Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803)调节细胞周期的分子机制.设计、时间及地点:对照实验,于2007-03/12在南方医科大学中医实验中心完成.材料:人结肠腺癌细胞株LoVo细胞由南方医院消化内科实验室提供;重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ载体为自行构建.方法:将重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ在HEK293A细胞中扩增,测定病毒滴度,然后在常氧下以感染复数10,20,30,40,50,60,70,80,90,100感染LoVo细胞.主要观察指标:X-gal染色检测重组腺病毒对LoVo细胞的感染效率;荧光定量PCR检测不同时间点低氧诱导因子1α与p21WAF1/CIP1的mRNA表达水平;MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:①重组腺病毒扩增后能获得较高的滴度,在LoVo细胞中具有很高的感染效率,感染效率与感染复数成量效关系,当感染复数为60时,感染效率为90%以上.②随低氧诱导因子1α表达的增高,p21WAF1/CIP1的表达也相应增高,两者存在正相关(r=0.945, P＜0.05).③与对照病毒相比,重组腺病毒感染后LoVo细胞增殖轻度受抑;细胞周期示G1期细胞明显增加,S期的细胞显著减少(P＜0.05).结论:①重组腺病毒载体介导的人HIF-1α-Ala564-Ala803基因可有效地转染LoVo细胞并成一定的量效关系.②低氧诱导因子1α在细胞周期的调节中发挥重要的作用,可能通过上调p21WAF1/CIP1的表达,诱导细胞周期停滞于G1期.
배경:목전연구현시저양유도인자1α가유도세포주기정체,단기궤제상불청초.목적:연구중조선병독돌변형인저양유도인자1α (Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803)조절세포주기적분자궤제.설계、시간급지점:대조실험,우2007-03/12재남방의과대학중의실험중심완성.재료:인결장선암세포주LoVo세포유남방의원소화내과실험실제공;중조선병독Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803화대조병독Ad-lacZ재체위자행구건.방법:장중조선병독Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803화대조병독Ad-lacZ재HEK293A세포중확증,측정병독적도,연후재상양하이감염복수10,20,30,40,50,60,70,80,90,100감염LoVo세포.주요관찰지표:X-gal염색검측중조선병독대LoVo세포적감염효솔;형광정량PCR검측불동시간점저양유도인자1α여p21WAF1/CIP1적mRNA표체수평;MTT검측세포증식;류식세포의검측세포주기적변화.결과:①중조선병독확증후능획득교고적적도,재LoVo세포중구유흔고적감염효솔,감염효솔여감염복수성량효관계,당감염복수위60시,감염효솔위90%이상.②수저양유도인자1α표체적증고,p21WAF1/CIP1적표체야상응증고,량자존재정상관(r=0.945, P＜0.05).③여대조병독상비,중조선병독감염후LoVo세포증식경도수억;세포주기시G1기세포명현증가,S기적세포현저감소(P＜0.05).결론:①중조선병독재체개도적인HIF-1α-Ala564-Ala803기인가유효지전염LoVo세포병성일정적량효관계.②저양유도인자1α재세포주기적조절중발휘중요적작용,가능통과상조p21WAF1/CIP1적표체,유도세포주기정체우G1기.