畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2009年
5期
769-774
,共6页
覃君慧%侯放亮%张晖%包慧君%周强%李梅英%初晓红%陈秋生
覃君慧%侯放亮%張暉%包慧君%週彊%李梅英%初曉紅%陳鞦生
담군혜%후방량%장휘%포혜군%주강%리매영%초효홍%진추생
鸡十二指肠黏膜%CDC25B-mRNA%探针合成%原位杂交
鷄十二指腸黏膜%CDC25B-mRNA%探針閤成%原位雜交
계십이지장점막%CDC25B-mRNA%탐침합성%원위잡교
应用RT-PCR方法从鸡胚中扩增CDC25B基因片段,将其连接于pGM-T easy.分别利用pGM-T easy中T7和SP6启动子及其RNA聚合酶,以线性化的CDC25B/pGM-Teasy为模板转录合成正,反义DIG标记RNA探针.以合成的地高辛(DIG)标记的CDC25B-mRNA为探针,进一步应用原位杂交组织化学方法(in situ hybridization histochemistry,ISHH)探查CDC25B-mRNA在鸡十二指肠黏膜的分布.结果表明,成年鸡十二指肠肠腺上皮细胞中有丰富的CDC25B-mRNA的转录,其中CDC25B-mRNA探针杂交阳性细胞在肠腺基底部和小肠绒毛中部分别占上皮细胞总数的81.60%±9.63%和36.21%±8.81%.原位杂交阳性产物大部分分布于十二指肠肠腺上皮"干细胞部"和"增生部"细胞的胞质和胞核,肠腺基底部杂交信号由下至上逐渐减弱,至小肠绒毛下部消失,转为阴性.在黏膜肌层以及肌肉层杂交反应呈阴性.本研究从基因水平证明了鸡十二指肠黏膜肠腺上皮"干细胞部"和"增牛部"细胞中有CDC25B-mRNA的存在,表明该区域有活跃的增殖过程,以补充绒毛上端死亡脱落的细胞.
應用RT-PCR方法從鷄胚中擴增CDC25B基因片段,將其連接于pGM-T easy.分彆利用pGM-T easy中T7和SP6啟動子及其RNA聚閤酶,以線性化的CDC25B/pGM-Teasy為模闆轉錄閤成正,反義DIG標記RNA探針.以閤成的地高辛(DIG)標記的CDC25B-mRNA為探針,進一步應用原位雜交組織化學方法(in situ hybridization histochemistry,ISHH)探查CDC25B-mRNA在鷄十二指腸黏膜的分佈.結果錶明,成年鷄十二指腸腸腺上皮細胞中有豐富的CDC25B-mRNA的轉錄,其中CDC25B-mRNA探針雜交暘性細胞在腸腺基底部和小腸絨毛中部分彆佔上皮細胞總數的81.60%±9.63%和36.21%±8.81%.原位雜交暘性產物大部分分佈于十二指腸腸腺上皮"榦細胞部"和"增生部"細胞的胞質和胞覈,腸腺基底部雜交信號由下至上逐漸減弱,至小腸絨毛下部消失,轉為陰性.在黏膜肌層以及肌肉層雜交反應呈陰性.本研究從基因水平證明瞭鷄十二指腸黏膜腸腺上皮"榦細胞部"和"增牛部"細胞中有CDC25B-mRNA的存在,錶明該區域有活躍的增殖過程,以補充絨毛上耑死亡脫落的細胞.
응용RT-PCR방법종계배중확증CDC25B기인편단,장기련접우pGM-T easy.분별이용pGM-T easy중T7화SP6계동자급기RNA취합매,이선성화적CDC25B/pGM-Teasy위모판전록합성정,반의DIG표기RNA탐침.이합성적지고신(DIG)표기적CDC25B-mRNA위탐침,진일보응용원위잡교조직화학방법(in situ hybridization histochemistry,ISHH)탐사CDC25B-mRNA재계십이지장점막적분포.결과표명,성년계십이지장장선상피세포중유봉부적CDC25B-mRNA적전록,기중CDC25B-mRNA탐침잡교양성세포재장선기저부화소장융모중부분별점상피세포총수적81.60%±9.63%화36.21%±8.81%.원위잡교양성산물대부분분포우십이지장장선상피"간세포부"화"증생부"세포적포질화포핵,장선기저부잡교신호유하지상축점감약,지소장융모하부소실,전위음성.재점막기층이급기육층잡교반응정음성.본연구종기인수평증명료계십이지장점막장선상피"간세포부"화"증우부"세포중유CDC25B-mRNA적존재,표명해구역유활약적증식과정,이보충융모상단사망탈락적세포.
